【摘 要】
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MicroRNA是广泛存在于真核生物中的重要的调节因子,在植物和动物中的研究发现其功能是多样的,并且在生物体内有着重要的调节功能,包括生长发育和逆境应答等众多方面。Aft（Anthocyanin fruit）型番茄LA1966是由原产智利的野生种番茄L.chilense与番茄栽培种L.esculentum杂交所得,其果实在未成熟阶段,可产生并积累花青素。本研究选用Aft型番茄为试材,对不同发育时期
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MicroRNA是广泛存在于真核生物中的重要的调节因子,在植物和动物中的研究发现其功能是多样的,并且在生物体内有着重要的调节功能,包括生长发育和逆境应答等众多方面。Aft（Anthocyanin fruit）型番茄LA1966是由原产智利的野生种番茄L.chilense与番茄栽培种L.esculentum杂交所得,其果实在未成熟阶段,可产生并积累花青素。本研究选用Aft型番茄为试材,对不同发育时期的番茄果实进行光暗处理。将处理后的材料经转录组测序及miRNA深度测序分析后,筛选得到差异表达基因microRNA156,预测其靶基因并验证其作用位点和互作关系。为探究miR156及其靶基因在番茄生长发育和花青素合成途径中的作用机制,构建 miR156相关的pCAMBIA1301重组植物表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化侵染番茄得到转基因植株。本试验为miRNA在植物果实发育中的调控通路提供一定的参考。本试验研究结果如下:1.转录组测序结果分析得到了 23个差异显著的基因,KEGG富集分析表明光、暗处理下的差异基因存在于多个代谢通路,主要集中在光合作用、核糖体和植物激素信号转导这三条代谢通路上。2.小RNA测序结果分析得到了 34个差异表达的miRNA,从中筛选得到miR156,降解组鉴定miR156对其靶基因的剪切功能。3.实时荧光定量PCR检测miR156及其靶基因在Aft番茄果实不同发育阶段中的表达特性。4.构建过表达oe-miR156和抑制表达STTM-miR156的重组植物表达载体,农杆菌介导遗传转化番茄,得到转基因植株,研究miR156的表达调控与转基因植株的发育表型。5.构建miR156的靶基因SlSPL15-pA7的重组表达载体,利用真空渗透洋葱表皮细胞,初步鉴定SlSPL15在细胞核中发挥功能。6.利用pAD-SPL、pBD-Del载体构建重组表达载体进行酵母双杂交检测miR156靶基因SPL蛋白与bHLH蛋白的相互作用,确定与转录因子的协同调控作用。
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