目的　　 分析非小细胞肺癌中MicroRNA let-7与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及临床意义,探讨其在非小细胞肺癌发生及发展中的作用及二者的相关性。　　 材料与方法　　 临床病例资料收集:收集中国医科大学附属第一医院胸外科2010年6月至2011年3月46例非小细胞肺癌患者手术切除的肺癌组织及其配对的癌旁组织(肿瘤远端5cm以外或手术边缘经病理检查未发现癌细胞),其中男性20例,女性26例,年龄46-71岁,中位年龄58岁,平均62岁。鳞癌13例,腺癌33例。留取标本已经医院伦理委员会批准,并在每次采集标本前均由患者签署知情同意书。　　 免疫组织化学染色及结果判定:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P法)检测MMP-2蛋白的表达,以PBS代替一抗作为阴性对照组。结果判定:根据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅计分,着色细胞比例1/3以下为1分:1/3-2/3为2分;2/3以上为3分。着色深度:无着色为0分;浅黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐色为3分。然后根据二者乘积作为每一例的积分,积分＜4分为阴性;≥4分为阳性。　　 蛋白免疫印迹及结果判定:收集组织(包括肺癌组织及配对的癌旁组织),匀浆,离心,Bradford比色法测定蛋白质浓度。12%SDS-PAGE电泳,恒定电压100V下转膜2小时,室温封闭1小时。用TBST将MMP-2-抗稀释至1:200,倒入已放好膜的孵育袋中4℃过夜。用TBST按1:10000配制二抗,室温下孵育2小时,ECL发光。测量灰度值,统计分析肺癌组和癌旁组织组中目的条带灰度值与内参灰度值比值的差异性。　　 实时定量PCR:收集组织(包括肺癌组织及配对的癌旁组织)使用试剂盒抽取总RNA,逆转录合成cDNA。采用反应体系包括SYBRPremixExTap12.50μl、引物各1μl、DNA模板20μl、ROXReferenceDye(50x)0.5μl、dH2O8μ1。反应条件为95℃,5S;60℃,30S;40个循环。U6和B-actin为内参照,运用2-△△CT法计算检测let-7和MMP-2相对表达量。　　 结果　　 MMP-2免疫组化染色的阳性产物为棕黄色颗粒,为浆表达。MMP-2在46例肺鳞癌和腺癌中阳性表达为30例(65.2%),在癌旁组织为7例(15.2%),统计学结果显示两者比较具有统计学意义(x2=24.3,P＜0.001)。MMP-2的表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移具有相关性(x2=4.28,P＜0.05;x=6.10,P＜0.05),而与病人的年龄、性别及病理分型统计学显示无相关性。　　 蛋白免疫印迹结果显示,肺癌组织相对表达量为3511.2±692.4,癌旁组织的相对表达量为1437.2±382.5,肺癌组织中MMP-2蛋白的表达高于对应的癌旁组织(t=10.698,p＜0.001)。　　 实时定量PCR示在46例肺鳞癌和腺癌中与配对的癌旁组织比较let-7低表达的为29例(63.0%),MMP-2高表达的为31例(67.4%)。统计学显示let-7和MMP-2在非小细胞肺癌和癌旁组织中的差异性表达具有统计学意义。在46例NSCLC组织中,let-7与MMP-2蛋白表达呈负相关(P＜0.05,rs=-0.433)。　　 结论　　 MMP-2及Let-7在肺癌中的表达存在异常,提示二者可能参与了肺癌的发生发展的过程。MMP-2的异常表达与淋巴结转移及临床病理分期相关,提示MMP-2在肺癌的发展中有一定促进作用。Let-7的低表达可能引起MMP-2表达的升高,两者之间可能存在某种协调关系,提示二者在肺癌的预后判断中可能有一定作用。