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研究背景：缺血性心脏病是因冠状动脉循环改变导致心肌缺血缺氧或坏死而引起的心脏病，严重危害着人类健康，从分子水平探索预防和治疗缺血性心脏病的新策略有重要的意义。在心肌受损后，Notch信号通路在促进心肌保护和损伤修复方面的功能十分明显，而ROCK基因在调控心肌细胞凋亡过程中也发挥着重要作用，因此我们推测在心肌细胞缺血缺氧背景下，Notch信号通路和ROCK基因在调控心肌细胞凋亡过程中存在着特定的关联。目的：（1）探讨Notch信号通路对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响;（2）初步探讨缺氧损伤后Notch信号通路调控ROCK2基因表达的作用机制，进而揭示心肌受损后Notch信号通路在调控心肌细胞凋亡和损伤修复过程中的分子机制。方法：（1）RT-PCR扩增编码H9c2心肌细胞Notch1胞内段（NICD）全长DNA序列，重组入pCMV-Tag2B质粒表达载体中，酶切、测序鉴定。将H9c2心肌细胞随机分四组：pCMV-Tag2B-NICD组、pCMV-Tag2B组、脂质体组（Lipofectamine）和Control组，使用Lipofectamine2000转染重组质粒于H9c2心肌细胞，Western blot检测NICD表达情况；（2）对体外培养的H9c2细胞进行缺氧复氧(21h/6h),模拟大鼠心肌缺血再灌注模型，将H9c2心肌细胞随机分为6组，正常对照组（Control组）、缺氧/复氧组（H/R）、NICD转染预处理组（NICD组）、NICD转染预处理+缺氧/复氧组（NICD+H/R组）、Notch信号通路特异性抑制剂γ-分泌酶抑制剂处理组（DAPT组）、γ-分泌酶抑制剂处理+缺氧/复氧组（DAPT+H/R组）。采用Annexin V/PI双染色法及流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，western blot检测胞内NICD和ROCK2蛋白表达情况。结果：（1）成功构建重组质粒pCMV-Tag2B-NICD，转染H9c2心肌细胞，western blot显示重组质粒转染H9c2心肌细胞后NICD蛋白表达水平明显增高(P<0.05)；（2）与Control组相比，过表达NICD后，ROCK2蛋白表达降低(P<0.05)，H9c2心肌细胞凋亡率下降(P<0.05)；抑制NICD后，ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)，H9c2心肌细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论：（1）成功构建了重组质粒pCMV-Tag2B-NICD；（2）缺氧/复氧处理后的H9c2心肌细胞中，Notch1蛋白表达升高，ROCK2蛋白表达降低；（3）激活Notch1信号通路能减少缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡，此作用机制可能是通过抑制ROCK2基因而实现。