人类的中枢神经系统受损伤后不能再生轴突，视神经损伤后视网膜神经节细胞亦是如此，易导致视网膜神经节细胞凋亡，这种不可逆的视网膜神经节细胞损伤，是致盲的主要原因。促进轴突的再生，预防视神经损伤后神经元的死亡，从而恢复有效视功能是外伤性视神经病的主要治疗目的。近年来，随着外伤性视神经病机理的深入研究及相关实验研究工作的不断开展，外伤性视神经病的治疗途径亦有多种，如周围神经移植；神经营养因子的注射治疗；以及雪旺细胞、嗅鞘细胞、干细胞移植等已经在很多的实验研究中进行了报道。然而，现在由于资源的限制，组织移植免疫排斥反应以及视网膜神经节细胞临时保护系统等诸多原因，目前有效治疗神经修复和防止视网膜神经节细胞凋亡的方法还很有限。　　近年来，骨髓间充质干细胞移植在治疗中枢神经系统疾病或外伤性视神经病方面显示出巨大的潜力和优势。据报道在脊髓损伤后的动物模型中骨髓间充质干细胞能持续分泌神经营养因子，这被认为是一个轴突再生的影响机制。此外，神经营养因子剥夺及缺乏已被证明是视网膜神经节细胞凋亡的主要原因。以前的研究已经表明神经营养因子，包括脑源性神经营养因子、神经生长因子、神经胶质细胞源性神经营养因子、睫状神经营养因子等等，具有营养成熟神经元的作用，并且能够参与损伤神经的再生及其功能的恢复。作为神经营养因子家族的一员，脑源性神经营养因子对视网膜神经节细胞再生具有深刻的影响，并且有利于神经元之间的突触连接。视神经损伤后骨髓间充质干细胞移植促进神经保护及延迟视网膜神经节细胞凋亡的作用如何呢？是否是通过分泌脑源性神经营养因子来实现仍然是未知的。　　本研究旨在探讨玻璃体腔内注射移植体外培养的骨髓间充质干细胞能否增加视神经损伤后家猫的视网膜神经节细胞存活数量，及其可能的潜在增长机制，希望通过研究为视神经受损伤后的有效修复治疗提供新的思路和方法。本课题主要分为以下三个部分分别进行基础研究和观察。　　第一部分 猫骨髓间充质干细胞的体外分离培养、纯化、鉴定　　目的：分离、培养、纯化家猫的骨髓间充质干细胞，并对获得细胞的表面标志物进行鉴定，为进一步利用骨髓间充质干细胞移植治疗视神经损伤家猫的的研究奠定基础。　　方法：利用全骨髓贴壁法对家猫骨髓间充质干细胞进行体外分离、培养、纯化；通过间断更换培养液获得较纯化的骨髓间充质干细胞，倒置相差显微镜下对细胞形态进行观察；根据第1、3、5、7、9代细胞的镜下增殖情况绘制出生长曲线；通过流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD34、CD44和CD90的表达率。　　结果：在倒置相差显微镜下观察，分离培养的骨髓间充质干细胞贴壁呈梭形或纺锤形；原代细胞生长丛集成片，5～7d达到融合，进行传代；培养到第三代以后，细胞出现相对均匀的梭形扁平外观，迅速增殖的细胞呈涡流样排列；第3、5代骨髓间充质干细胞增殖能力强于第7、9代；采用流式细胞仪分析鉴定表明，细胞的CD34、CD44和CD90阳性率分别为17.5％、97.9%和91%，这与骨髓间充质干细胞表面抗原的表达一致。　　结论：分离培养的细胞具有骨髓间充质干细胞特性，培养所得细胞就是骨髓间充质干细胞，其成分相对单一。第3、5代细胞纯度高，增殖能力强，适合用于进一步的实验研究。　　第二部分 标准化家猫外伤性视神经损伤动物模型的建立　　目的：利用统一标准的视神经夹在相同钳夹时间下对家猫视神经进行损伤实验，观察视神经部分损伤后家猫的闪光视觉诱发电位的变化，建立标准化的外伤性视神经损伤家猫动物模型。　　方法：共有10只健康的成年家猫，每只家猫的右眼为实验眼(视神经损伤)，左眼为对照眼（正常）。家猫的右眼损伤眼均以统一标准的视神经夹钳夹视神经30秒，制成家猫视神经部分损伤模型。在实验眼损伤后1小时、3天、1周、2周、4周时分别进行实验眼和对照眼的闪光视觉诱发电位检查，记录主波Pl00的峰潜时和波幅，并进行统计学分析。　　结果：所有家猫正常对照眼的闪光视觉诱发电位的波形稳定，随时间延长均无明显变化。损伤前实验组与对照组主波Pl00的峰潜时、波幅两组比较无统计学意义(P＞0.05)；实验组伤后各时间段主波Pl00的峰潜时延长及波幅降低，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。　　结论：应用统一标准的视神经夹可以成功建立标准化的外伤性视神经损伤家猫动物模型。闪光视觉诱发电位检查是确定标准化家猫外伤性视神经损伤动物模型建立成功与否的客观评价指标，成功的视神经损伤家猫动物模型表现为闪光视觉诱发电位主波Pl00的峰潜时延长及波幅降低。　　第三部分 骨髓间充质干细胞移植对视神经损伤家猫视网膜神经节细胞及脑源性神经营养因子表达的影响　　目的：本研究旨在探讨玻璃体腔内注射移植体外培养的骨髓间充质干细胞能否增加视神经损伤后家猫的视网膜神经节细胞存活数量，以及其可能的潜在作用机制。　　方法：在外伤性视神经损伤家猫动物模型成功建立后，骨髓间充质干细胞移植组予玻璃体腔内注射骨髓间充质干细胞，磷酸盐缓冲液组予玻璃体腔内注射磷酸盐缓冲液。分别在移植后的3天、7天、14天及28天，用免疫荧光染色双十八烷基四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐染色标记法观察分离视网膜的视网膜神经节细胞存活率，用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验方法检测分离视网膜的脑源性神经营养因子的含量。　　结果：分析表明，在术后3天、7天、14天及28天，在周边区及中央区视网膜上视网膜神经节细胞密度均显著减少（周边区：P3d=0.0446,P7d=0.0011,P14d＜0.001,P28d＜0.001；中央区：P3d=0.0437,P7d=0.0067,P14d＜0.001,P28d＜0.001）。7天、14天、28天后骨髓间充质干细胞移植组视网膜神经节细胞密度显著高于磷酸盐缓冲液对照组(P＜0.001)。7天、14天、28天后脑源性神经营养因子含量在移植组明显高于磷酸盐缓冲液对照组（P＜0.05）。　　结论：骨髓间充质干细胞移植后可以减缓外伤性视神经损伤家猫视网膜神经节细胞凋亡，并显著增加其视网膜脑源性神经营养因子的表达。视神经损伤后骨髓间充质干细胞介导的的神经保护作用可能与脑源性神经营养因子表达有关。