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草乌（Aconiti kusnezoffii Radix）为毛茛科植物北乌头(Aconitum kusnezoffiiReichb.)的干燥块根，民间药用历史悠久，常被用于治疗风湿、麻痹、寒疝、疼痛等症状。草乌的主要生物活性成分为二萜类生物碱，其中普遍存在且含量较高的是乌头碱、次乌头碱和新乌头碱。它们既是药材中主要的药效成分，同时又是毒性很强的成分，用药不当易造成中毒现象，这就使草乌的广泛应用受到了限制，因此，为保证服用安全，必须严格控制药材中此类生物碱成分的含量。本文对草乌中的生物碱类成分进行了研究。首先从草乌的乙酸乙酯提取物中分离得到八个生物碱类化合物，除常见三种乌头碱型生物碱外，对其余五个化合物采用核磁、质谱等波谱学手段鉴定了化学结构，它们分别为准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、塔拉乌头胺、多根乌头碱、3-脱氧乌头碱。其中准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、多根乌头碱均为首次从草乌中分离得到。本文还建立了草乌中准噶尔乌头碱的HPLC-ELSD含量测定方法。一、生物碱类化学成分的提取、分离和结构鉴定1.1提取取干燥的草乌10kg，粉碎，以乙酸乙酯-氨水溶液（20:1）为流动相渗漉提取，将提取液浓缩，用0.5%的HCl酸化至pH=1～2，乙酸乙酯萃取4次，将水层合并、浓缩，再用0.5%的NaOH碱化至pH=11～12,乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯层合并、浓缩，得粗提取物310g。1.2分离及纯化将粗提取物（310g）进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯-二乙胺为流动相梯度洗脱，得到五个部分。将第一部分（40g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到A（10g）、B（5g）两个部分。A部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-1（2.0g）和化合物cw-6（860mg）。B部分经过硅胶柱层析和重结晶，得到化合物cw-3（1.0g）。将第二部分（35g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到C（9.4g）、D（3.0g）两个部分。C部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-7（560mg）和C-1（5.2g）部分；再将C-1部分进行硅胶柱层析，并经重结晶得到化合物cw-5（200mg）。将D部分进行硅胶柱层析，并经重结晶得到化合物cw-2（550mg）。将第四部分（42g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到E（17g）部分。再将E部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-8（4.0g）和E-1（5.0g）部分；E-1部分经硅胶柱层析和重结晶得到化合物cw-4（70mg）。1.3结构鉴定通过薄层色谱（TLC）与标准品对照，鉴定化合物cw-6、cw-7、cw-8分别是乌头碱、次乌头碱和新乌头碱；利用核磁、质谱、红外等波谱分析手段，经与文献对照鉴定了另外5个化合物的结构，它们分别是准噶尔乌头碱（cw-1）、准噶尔乌头胺（cw-2）、塔拉乌头胺（cw-3）、多根乌头碱（cw-4）、3-脱氧乌头碱（cw-5）。其中准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、多根乌头碱均为首次从草乌中分离得到。二、 HPLC-ELSD法测定草乌中准噶尔乌头碱（cw-1）的含量2.1仪器和色谱条件所用的高效液相色谱仪为Agilent1200HPLC，检测器为Alltech2000ELSD；色谱柱为Agilent Extend-C18(4.6×250mm,5μm)；流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液（40:60），柱温为25℃，流速为1.0mL·min-1，进样量为20μL。ELSD检测器的漂移管温度设为96℃，气体（空气）压力为2.50bar，撞击器呈关闭状态。2.2方法学考察2.2.1线性关系在进样量1.5μg～30μg范围内化合物cw-1的lgS均（S均为平均峰面积）和lgm（m为进样质量）具有良好的线性关系，线性方程为：lgS均=1.6311lgm+0.1061，R2=0.9991。2.2.2精密度实验化合物cw-1日内和日间峰面积的RSD值分别为0.26%和1.54%，均小于2%，说明精密度良好。2.2.3重复性试验6份供试品溶液的测定结果显示，化合物cw-1含量的RSD值为1.41%，小于2%，说明重复性良好。2.2.4稳定性试验将供试品溶液在0～10h内，每隔2h测定一次。结果显示，化合物cw-1峰面积的RSD值为1.68%，小于2%，说明供试品溶液在0～10h内稳定性良好。2.2.5加样回收率化合物cw-1的平均加样回收率为96.86%，RSD值为1.67%，说明回收率良好。2.3含量测定河北安国产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为0.9238mg·g-1，吉林磐石产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.319mg·g-1，云南大理产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.768mg·g-1，安徽亳州产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.635mg·g-1。结果表明，不同产地的草乌药材中准噶尔乌头碱的含量略有差别,但大多数在0.1%以上,属于含量较高的生物碱类成分。因此，有必要将准噶尔乌头碱的含量测定指标纳入草乌药材质量标准之中。三、总结本文在国内外学者研究的基础上，对草乌中的生物碱类化学成分进行了深入研究，共分离并鉴定了8个单体化合物，其中3个为首次从草乌中分得，本文还建立了草乌中准噶尔乌头碱的HPLC-ELSD含量测定方法。本文的研究结果为草乌药材质量标准的完善以及药材安全、合理的应用提供了科学依据。