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柠檬烯(limonene,LIM)主要是由芸香科植物甜橙、葡萄柚和柠檬等的湿皮经冷榨精制而成的具有令人愉快香气的化合物,其广泛存在于各种辛香料挥发油中。LIM药理作用广泛,目前在临床上LIM主要用于利胆、溶石、促进消化液分泌和抑制肿瘤活性等。因其独特的柠檬香气和广泛的药理活性,近年来在香料香精、食品工业和医药领域都显示出了巨大的优势和开发潜力。然而,LIM的低水溶性、强挥发性和极差的生物利用度,使其临床上的应用受限。本课题以自微乳化给药系统(self-microemulsifying drug delivery system,SMEDDS)为给药载体,增加水难溶性药物LIM的溶解度,促进其体内外释放及提高其生物利用度,并在LIM自微乳(L-SMEDDS)的基础上制备LIM固体自微乳(L-S-SMEDDS)速释微丸,将液体制剂固体化以达到提高液体制剂的稳定性和便于携带等目的,全文主要分为以下五个部分。 第一部分 综述 本部分主要对LIM的基本理化性质、药理活性及制剂的研究进展进行了综述,并阐述了自微乳化制剂应用的概况,为本课题后续开展的制剂学研究奠定理论基础。 第二部分 处方前研究 本部分建立了高效液相色谱(HPLC)法,对L-SMEDDS中LIM的含量进行检测及对所构建的分析方法进行验证。同时,本部分以LIM原料药为研究对象,测定了LIM在不同pH(1.2和6.8)介质及双蒸水中的平衡溶解度及油水分配系数。结果显示在pH6.8时所测得的溶解度最大,但其值仅为0.051 mg·g-1,表明LIM几乎不溶于水。摇瓶法测定不同pH(1.2和6.8)介质及双蒸水中的油水分配系数分别为2.29、2.03和2.08,表明LIM疏水性较强。 第三部分 LIM自微乳的制备及体外表征 本部分首先通过测定LIM在各个油相、乳化剂及助乳化剂中的溶解度和对各个油相、乳化剂及助乳化剂之间的相容性进行考察,初步筛选了合适的SMEDDS体系的组成成分。随后,进一步通过对伪三相图的构建,确定了L-SMEDDS的最佳处方为m(LIM)∶m(ethyl oleate)∶m(CremophorEL35)∶m(isopropanol)=2∶1∶2∶2。 本部分对最佳处方所制备的L-SMEDDS进行物理化学表征。首先,通过染色法鉴别L-SMEDDS所形成微乳的类型;随后,采用粒度分析仪分别测定其粒径分布及Zeta电位,且通过透射电镜(TEM)观察其微观形态;最后,本部分考察了L-SMEDDS在不同的释放介质中的体外释药情况,并初步评价了该制剂的稳定性。结果显示L-SMEDDS所形成微乳为O/W型体系,平均粒径为104.5nm,Zeta电位值为-5.45 mV;10 min内在不同释放介质中的累积释放率可达86%以上,说明SMEDDS起到了显著改善LIM体外释放的作用;稳定性实验表明本实验制备的L-SMEDDS在较低温度下,30天内具有良好的稳定性。 第四部分 LIM自微乳大鼠体内药动学及小鼠体内分布特性的研究 本部分以SD大鼠及KM小鼠为动物模型,建立了LIM体内分析方法。以自制L-SMEDDS为受试制剂,以LIM原料药为对照制剂,对相关药物动力学参数以及体内组织分布特性进行了考察。药动学结果显示:LIM原料药、L-SMEDDS的Cmax分别为330.4±19.7 ng·mL-1和985.0±28.5 ng·mL-1,说明SMEDDS促进了LIM的体内吸收。LIM原料药与L-SMEDDS的tmax均为6h,且两者的t1/2和MRT相差不大,AUC0-24分别为2335.9±237.7 h·ng·mL-1和8678.7±473.6h·ng·mL-1,L-SMEDDS相较于LIM原料药的相对口服生物利用度为371.5%,说明本文所制备的L-SMEDDS显著提高了LIM的生物利用度。小鼠经口服L-SMEDDS后0.5、1、2、4、6和8h的体内分布实验结果表明,所制备的L-SMEDDS趋向于肝、脾、肾、脑部聚集并存在明显的二次吸收现象,且其在小鼠组织及血浆中的分布总浓度明显高于LIM原料药。 第五部分 LIM固体自微乳微丸的制备及体外表征 本部分利用固体吸附技术与挤出滚圆技术相结合制得了L-S-SMEDDS速释微丸。首先,通过考察不同吸附材料对L-SMEDDS浓缩液的吸附能力,筛选得到最佳的吸附载体材料为微晶纤维素(MCC),并对载药量进行了考察,确定了制备L-S-SMEDDS速释微丸的MCC与L-SMEDDS质量比为55∶45。其次,采用正交设计对挤出滚圆的各个工艺参数进行了优化,筛选得到了最优的挤出速度、滚圆速度和滚圆时间分别为50 Hz、40 Hz和8 min。最后,从圆整度、收率、体外溶出及稳定性等方面对L-S-SMEDDS速释微丸进行了体外评价。实验结果显示所制备的微丸圆整度为16.7°、收率为60.4%、稳定性良好,且1h内的累计释放率可达81%,符合相关制剂学要求。