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[目的]Th17细胞以表达IL—17而得名,是不同于Tb1、Th2的CD4+T细胞新亚群。现已证实,Th17细胞参与机体的免疫应答、炎症反应、自身免疫性疾病以及移植物抗宿主病等。近年来研究发现,Th17细胞可能在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用,尤其与炎症相关性肿瘤关系密切。然而,目前对于Th17细胞在肿瘤中的表达及生长与调控机制仍不完全清楚。鉴于食管癌是一种与炎症关系较为密切的常见恶性肿瘤,本课题旨在观察食管癌患者体内Th17细胞的分布并探讨其机制,以期获得对临床的指导意义。
[方法]依据食管癌pTNM分期(UICC,2009)将57例食管癌患者分为两组:Ⅰ期(n=13)为早期食管癌;Ⅱ、Ⅳ和Ⅳ期(n=44)为进展期食管癌。本课题采用流式细胞术检测食管癌患者外周血中Th17细胞占CD4+T细胞的比例,并结合患者的临床及病理资料分析食管癌患者外周血中Th17细胞的比例变化与临床及病理特征的关系;同时检测进展期食管癌患者肿瘤、瘤旁组织及肿瘤引流淋巴结、肠系膜对照淋巴结中Th17细胞占CD4+T细胞的比例,以了解Th17细胞在食管癌患者体内的分布情况;另外,通过流式细胞术检测外周血Th17细胞表面表达趋化因子受体CCR4、CCR6的情况,免疫组化方法检测进展期食管癌肿瘤组织中特异性趋化因子CCL22、CCL20的表达水平,并进行Th17细胞的体外迁移实验;此外,利用逆转录酶PCR(RT—PCR)法检测进展期食管癌肿瘤组织中Th17细胞相关因子(TGF—β、IL—6、IL—1β及IL—23p19)的mRNA水平,以初步探讨肿瘤组织中Th17细胞聚集的机制。
[结果]
1)食管癌患者外周血中Th17细胞占CD4+T细胞的比例明显高于健康对照组(p<0.01);结合临床病理资料进一步分析提示,食管癌患者外周血Th17细胞表达的上调与患者的年龄、性别及肿瘤的位置、病变长度、分化程度、浸润深度、组织学类型无关(p>0.05),而与肿瘤的pTNM分期及有无淋巴结转移有关(p<0.01)。
2)食管癌患者肿瘤引流淋巴结中Th17细胞占CD4+T细胞的比例明显高于其自体肠系膜对照淋巴结(p<0.01);且在同一患者体内的外周血及肿瘤、瘤旁组织中,Th17细胞的比例以肿瘤组织中最高,而外周血中最少(p<0.01)。
3)食管癌患者外周血中Th17细胞表面高表达CCR4、CCR6,其中CCR6在Th17细胞表面的表达在食管癌患者外周血及健康对照组之间无明显差异(p>0.05),而CCR4的表达虽在早期病例中较健康对照组无明显差异(p>0.05),但在进展期食管癌患者外周血Th17细胞表面的表达明显高于健康对照组(p<0.01);同时肿瘤微环境中存在大量的CCR4、CCR6特异性配体CCL22、CCL20,两者在食管癌肿瘤组织中的表达均明显高于其自体对照瘤旁组织(p<0.01),但在同一患者肿瘤组织中的表达两者之间差异无统计学意义(p>0.05);Transwell迁移实验证明趋化因子CCL22、CCL20都能有效地促进食管癌患者外周血中的Th17细胞迁移;此外,食管癌肿瘤组织内Th17细胞相关因子(TGF—β、IL—6、IL—1β及IL—23p19)mRNA的表达水平均较自体对照瘤旁组织增高。
[结论]此研究证实了食管癌患者肿瘤微环境中Th17细胞的表达,推测Th17细胞可能参与了食管癌的病理进展。Th17细胞可能通过原位分化增殖及循环趋化聚集两种途径在肿瘤微环境中富集。这些结果为我们进一步研究Th17细胞在食管癌发生、发展中所起的作用提供实验依据,并为食管癌的免疫治疗提供新的思路。