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目的:通过TgAb诱导人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-Ori 3-1损伤建立甲状腺自身抗体损伤甲状腺细胞模型,从640味中药中筛选对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞有明显保护作用的药物。根据筛选药物功效和最佳作用浓度配比组方,研究组方对细胞模型的保护作用,为中医药在临床治疗桥本甲状腺炎提供有益探索和科学实验依据。方法:1.利用TgAb诱导Nthy-Ori 3-1细胞发生损伤,运用MTT比色法对细胞损伤情况进行检测,确定TgAb作用浓度和作用时间,建立TgAb损伤甲状腺滤泡上皮细胞模型;运用倒置显微镜观察细胞模型形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫荧光标记技术检测Tg抗原抗体特异性结合,ELISA技术检测细胞上清T4含量。2.将640味中药分别作用于人正常甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-Ori 3-1和TgAb损伤甲状腺细胞模型,利用MTT比色法,对比各单味药对正常细胞作用和对细胞模型的保护作用,筛选出对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞模型有明显净保护作用的药物,并绘制筛选出有效药物作用的量效、时效关系图。3.根据筛选出的药物功效和最佳作用浓度进行组方,并将组方分别作用于正常细胞和细胞模型,MTT法检测组方对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞净保护作用的量效、时效关系,并绘制量效、时效关系图。4.将筛选出的单味药物及组方分别作用于Nthy-Ori 3-1细胞和TgAb损伤后的细胞模型,倒置显微镜观察药物作用后细胞形态变化,流式细胞术检测单味药物及组方作用后细胞凋亡变化,ELISA技术检测T4含量。5.运用IBM SPSS23.0和Graph Pad Prism8.0.2软件的回归分析、单因素方差分析、T检验方法对实验结果进行统计学分析。结果:1.利用TgAb可以诱导Nthy-Ori 3-1细胞发生损伤,其损伤程度与TgAb作用浓度和作用时间呈正相关关系;2.倒置显微镜观察损伤后细胞贴壁能力差,透光度降低,胞内存在明显空泡样结构和细胞碎片;流式细胞术检测细胞模型损伤率达45%+,与MTT比色法所测结果一致;免疫荧光标记技术检测Tg抗体抗原可特异性结合于细胞胞质内;ELISA技术检测细胞模型上清中T4含量较正常细胞出现明显降低(P<0.01),呈甲状腺功能减退状态;3.从640味药物中筛选出对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞净保护作用较高的5味药物,分别是贯众、黄芪、拳参、藤梨根、人参,根据药物功效将其组成清热方、益气方、益气清热方。4.MTT量效、时效实验结果显示贯众、黄芪、拳参、人参、清热方、益气方、益气清热方对细胞损伤的保护作用均随药物作用浓度升高呈现先升高后降低的关系,藤梨根对细胞损伤的保护作用则随作用浓度升高而升高。5.部分方药作用于正常细胞和损伤后的细胞模型,细胞形态较模型组边缘清晰,透光度好;流式细胞术检测方药作用后细胞凋亡率下降,以人参作用尤为明显;ELISA技术检测方药作用后细胞上清中T4含量较模型组上升,其中人参、益气清热方组T4含量接近正常水平。结论:1.甲状腺自身抗体TgAb成功建立甲状腺自身抗体损伤甲状腺滤泡细胞模型。2.从640味中药中筛选出对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞具有明显保护作用的黄芪、人参、贯众、拳参、藤梨根5种中药,组成益气清热方。3.益气清热方及其益气、清热两个拆方对TgAb损伤甲状腺滤泡细胞具有保护作用。