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痕实验以及侵袭实验检测Smad4对SW480细胞运动迁移以及侵袭能力的影响。4)通过Real-time PCR以及Western Blot、免疫荧光的方法分别从mRNA和蛋白水平检测Smad4对淋巴管生成相关蛋白VEGF-C. VEGF-D的作用。5)动物实验体内检测Smad4对结肠癌细胞体内成瘤能力的影响,并以免疫组化染色方法检测移植瘤中淋巴管生成相关蛋白Smad4、VEGF-C、VEGF-D的表达。同时研究瘤组织中Smad4蛋白表达与微淋巴管密度(lymphatic microvessel density, LMVD)的相关性,探讨Smad4对肿瘤淋巴管生成可能存在的调节作用。结果：1) Smad4在结肠癌细胞系中普遍呈低表达状态,成功构建基因调控Smad4高表达的结肠癌SW480细胞。2)在体外实验中,Smad4过表达对SW480细胞的增殖无影响；Smad4可抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移能力。3)在体外实验中,Smad4能抑制结肠癌细胞中VEGF-C的mRNA和蛋白的表达,但对VEGF-D的表达无影响。4)Smad4抑制小鼠体内种植瘤的生长,且抑制瘤体组织中VEGF-C、VEGF-D及Podopanin蛋白的表达。5) Smad4抑制小鼠体内移植瘤内的淋巴管生成。结论：在体外实验中,Smad4抑制结肠癌细胞的侵袭迁移能力,对结肠癌细胞的增值无影响。Smad4抑制了结肠癌细胞中VEGF-C的表达,对VEGF-D的表达无影响。种植瘤中VEGF-C、VEGF-D蛋白表达与Smad4蛋白表达呈负相关,提示VEGF-C表达可能受抑癌基因Smad4的负调控；种植瘤中LMVD与Smad4蛋白表达呈负相关,进一步验证了Smad4对肿瘤淋巴管生成的抑制作用。Smad4可能通过下调VEGF-C的表达而达到抑制结肠癌淋巴管生成的作用。TGF-β/Smad4信号通路可能是VEGF-C/VEGFR-3通路的上游的调控因素,但其具体的调控机制还有待进一步的研究探讨。