石蒜属植物杂交育种技术的研究

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本研究结合石蒜属植物种间及种内杂交试验、分子标记技术和离体快繁技术进行杂交种的培育,取得了如下结果:1、以离体萌发法测定不同倍性和天然杂交种的石蒜属植物花粉生活力,结果表明二倍体的花粉萌发率高,三倍体及杂交种的花粉萌发率低。对花粉贮藏性状的研究得出,花粉活力在常温下,可保持一周;4℃贮藏可保持2个月左右;-20℃贮藏活力可保持半年左右。2、以石蒜属不同的二倍体植物作为亲本,设计12个杂交组合试验,结果表明杂交组合的结实率基本上都在50%以上。关于杂交亲和率较低的石蒜×中国石蒜的不亲和性研究表明乳突细胞、花粉管和花柱通道细胞中胼胝质的不规则沉积,以及花粉粒在柱头上萌发数量少且异常是引起杂交结实率较低的主要原因。3、分子标记技术进行种质鉴定(1)建立了石蒜属植物的SCoT-PCR体系:DNA模板2ng·μL-1,引物0.125μmol·L-1,dNTPs0.2mmol·L-1,Mg2+3.0mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0U。(2)利用SSR标记和SCoT标记分析石蒜属植物种间和种内的遗传多样性,SSR标记将11种石蒜聚为3大类,其中乳白石蒜单独一类,并选出17号SSR引物用于石蒜杂交种的早期鉴定;SCoT标记将11种石蒜聚为4类,其中换锦花单独一类,其他聚类结果与SSR相似。4、石蒜属植物离体快繁体系的建立(1)以石蒜和中国石蒜的双鳞片为材料,建立了其离体快繁体系,选出不同阶段的最适培养基,诱导培养基: MS+6-BA1mg·L-1+NAA0.2mg·L-1;增殖培养基: MS+6-BA0.5mg·L-1+2,4-D1mg·L-1;壮苗培养基: MS+6-BA1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1;生根培养基:1/2MS+NAA0.5mg·L-1。(2)以杂种胚为材料建立离体快繁体系,选出愈伤组织诱导的最佳培养基:MS+6-BA1.0mg.L-1+2,4-D0.5mg.L-1;愈伤组织诱导小鳞茎的最佳培养基:MS+6-BA2.0mg.L-1+2,4-D1.0mg.L-1
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