【摘 要】
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目的:研究ECEL1基因对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌防治提供新的靶点。方法:应用ECEL1基因的慢病毒载体,体外感染人肝癌细胞(BEL-7404、Huh-7)并通过荧光显微镜检测感染效率。提取细胞总RNA以及总蛋白,通过qPCR以及Western blot检测细胞中ECEL1 mRNA以及蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测BEL-7404、Huh-7细胞的凋亡率及细胞周期。最后应用Caspase-
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目的:研究ECEL1基因对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌防治提供新的靶点。方法:应用ECEL1基因的慢病毒载体,体外感染人肝癌细胞(BEL-7404、Huh-7)并通过荧光显微镜检测感染效率。提取细胞总RNA以及总蛋白,通过qPCR以及Western blot检测细胞中ECEL1 mRNA以及蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测BEL-7404、Huh-7细胞的凋亡率及细胞周期。最后应用Caspase-Glo?3/7 Assay试剂盒检测BEL-7404、Huh-7细胞中Caspase 3/7的活性。结果:1.ECEL1基因慢病毒载体体外感染人肝癌细胞后,检测感染效率大于80%。2.shECEL1组BEL7404、Huh-7细胞内的ECEL1 mRNA以及蛋白表达水平均要显著低于shCtrl对照组(P<0.01)。3.流式检测结果显示,ECEL1基因敲减后BEL-7404、Huh-7细胞的细胞凋亡率显著上升,均要显著高于shCtrl对照组(P<0.01)。4.shRNA抑制BEL-7404、Huh-7细胞内ECEL1基因表达后,BEL-7404细胞S期明显减少,G2/M期的细胞则明显增多(P<0.01);而Huh-7细胞内S期、G1期、G2/M期的细胞均无显著变化。5.Caspase-Glo?3/7 Assay试剂盒检测显示,shECEL1组内BEL7404、Huh-7细胞的Caspase-3/7活性要显著高于shCtrl对照组(P<0.01)。结论:ECEL1基因敲减能够促进肝癌细胞(BEL7404、Huh-7)凋亡。
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