吉马酮抑制肝癌Bel7402细胞增殖机制初步研究

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莪术是药用价值极高的中药材,具有抗炎保肝,抗菌抗血栓形成,抗肿瘤的功效,在中医临床上有着广泛的应用。吉马酮是从莪术中提取的一种倍半萜类化物,据报道有显著的抑癌效果,但是其抗癌机理尚未完全揭示。本文以肝癌Bel7402细胞为研究材料,应用MTT,Flow Cytometry,Western Blotting等方法研究吉马酮对肝癌Bel7402细胞的增殖影响,主要研究结果包括以下几个方面:1.吉马酮选择性地抑制人肝癌Bel7402细胞增殖,且呈现浓度依赖性,但是没有明显的时间依赖性。MTT比色法结果表明,吉马酮能够显著抑制Bel7402细胞的增殖,且药物浓度越高、其抑制作用越显著,而24h与48h的抑制效果无统计学差异,24h处理的半抑制浓度约为160μM,但同样处理对正常肝细胞LO2没有明显的毒副作用。2.吉马酮剂量依赖性地促进人肝癌细胞Bel7402的凋亡和上调活性氧含量。通过Hochest染色和流式细胞检测,发现吉马酮可以促进Bel7402细胞的凋亡,且药物浓度越高,抑制作用越明显。Western Blotting检测凋亡相关蛋白的表达,表明吉马酮可以显著促进抑癌基因P53和Bax的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达。同时流式测定结果表明吉马酮可以浓度依赖性地提高Bel7402的活性氧浓度。以上结果表明吉马酮有促进Bel7402细胞凋亡的效果并且涉及Bel7402细胞的氧化性损伤。3.吉马酮促进Bel7402细胞凋亡是通过JAK2/STAT3信号通路实现的。用JAK2/STAT3信号通路的激动剂白细胞介素IL-6和吉马酮对Bel7402进行不同处理后,Western Blotting检测结果表明吉马酮下调细胞中p-STAT3水平而IL-6上调p-STAT3水平,与此同时,p-STAT3的下游抑癌基因P53的蛋白表达水平呈现相反变化。这些结果说明吉马酮可以抑制Bel7402细胞中组成性激活因子STAT3的磷酸化,从而上调其下游基因P53的蛋白表达水平。以上结果表明,吉马酮有非常明显抑癌作用,同时对正常肝癌细胞的副作用很小,可以作为一种新的肝癌临床治疗药物。
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