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食管癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤,位于全球肿瘤发病的第八位,肿瘤死亡的第六位。在世界范围内,食管癌高发区包括：中国、南非、东非等。据最新报道,食管癌标化死亡率最高的地区仍然是河南省(32.95/10万人)。对食管癌相关基因的深入研究,对于食管癌的早期诊断和开发有效的基因治疗靶点及策略非常重要。Eph/Ephrin家族是目前已知最大的RTKs家族之一。Eph与ephrin介导的双向信号传导参与调节机体的许多正常生理机能,内稳态及疾病和肿瘤的发生发展。目前,关于Eph/Ephrin家族在食管癌中的表达及作用报道甚少,因而,我们检测分析了EphBl和EphrinB1在食管癌原发灶及其匹配的正常食管组织中表达水平及其与临床病理参数的关系和意义,进一步研究EphrinB1对食管癌细胞生长的影响。材料与方法1对象选择、组织样本的采集与患者临床资料的收集选取2007年至2008年在河南省林州市肿瘤医院就医的食管癌患者作为研究对象。采集92例手术后患者食管癌原发灶及其匹配的正常食管组织样本,均经病理学鉴定。收集病人基本资料和相关临床病理资料,便于统计分析和研究。2样本中EphBl和EphrinBl mRNA水平的测定采用实时荧光定量PCR技术测定食管癌组织中EphBl和EphrinB1 mRNA表达水平,以P-actin作为内参基因。通过测定样本中目的基因模板的Ct值即循环阈值来反映模板的含量。3样本中EphBl和EphrinBl蛋白水平的测定通过western blot和免疫组织化学染色法测定食管癌癌组织中EphBl和EphrinB 1蛋白表达水平。每一标本在200倍显微镜下观察3个染色最强的视野,记数阳性细胞数,并计算阳性细胞百分比,每个患者的食管癌组织中阳性细胞百分比与正常食管组织中阳性细胞百分比的比值作为食管癌蛋白表达水平指标。4细胞转染将EphrinB 1的表达载体和pcDNA3.1空载体分别转入TE-12细胞。经克隆后,通过western blot检测EphrinB 1的表达水平,并采用MTT比色法分析EphrinB 1对TE-12细胞生长的影响。5统计学分析运用SPSS12.0统计软件,采用配对t检验比较mRNA表达水平。采用x2检验比较EphBl和EphrinB1 mRNA及蛋白表达水平与其临床病理参数的关系。以a=0.05作为检验水准。结果1食管癌中EphBl和EphrinBl mRNA表达及其与临床病理参数的关系1.1 EphBl和EphrinBl在食管癌中(?)nRNA的表达荧光定量PCR结果显示,与匹配的正常食管组织相比,EphB1和EphrinB 1分别在66.3%(61/92例)和64.2%(59/92例)食管癌组织表达上调。配对t检验显示：食管癌组织与匹配正常食管组织中EphBl和EphrinB1 mRNA的表达水平均有统计学差异(t=8.555, P＜0.001;t=7.488, P＜0.001)。Pearson’s相关分析表明,在食管癌组织中,EphB1和EphrinB1 mRNA表达呈高度正相关(r=0.625,P<0.001)。1.2食管癌中EphBl和EphrinBl mRNA表达水平与临床病理参数的关系与无肿瘤家族史组相比,EphB1 mRNA水平在有肿瘤家族史组中高表达(χ2=6.458,P<0.05)。EphB1在有淋巴结转移者中的表达高于无淋巴结转移者(χ2=7.422,P<0.01)。在吸烟患者癌组织中,EphrinB1 mRNA表达水平高于非吸烟患者(χ2=4.394,P<0.05)。与无淋巴结转移者相比,EphrinB1 mRNA在有淋巴结转移者中高表达(X2=9.159, P<0.01)。EphrinB1 mRNA的表达与浸润深度之间有显著的相关性(χ2=6.438,P<0.05)。2食管癌中EphBl和EphrinBl蛋白表达及其与临床病理参数的关系2.1 Western blot分析与正常组织相比,EphBl和EphrinB 1蛋白表达水平在肿瘤组织中呈现明显的上调趋势。2.2 EphBl和EphrinBl在食管癌中的蛋白表达EphBl和EphrinB 1蛋白表达水平分别在63.0%(58/92例)和60.9%(56/92例)食管癌组织中表达阳性,与real time PCR结果一致。2.3食管癌中EphBl和EphrinBl蛋白表达水平与临床病理参数的关系EphBl蛋白在有肿瘤家族史组中的表达水平高于无肿瘤家族史组(χ2=4.147,P<0.05）。淋巴结转移组食管癌组织中EphB1蛋白表达高于淋巴结未转移组(χ2=5.733,P<0.05)。EphB1蛋白的表达与浸润深度之间也具有显著的相关性(χ2=5.674,P<0.05)。吸烟人群EphrinB1蛋白表达水平高于不吸烟人群(χ2=5.787,P<0.05)。有肿瘤家族史组EphrinB1蛋白表达水平高于无肿瘤家族史组(χ2=5.376,P<0.05)。淋巴结转移组EphrinB1蛋白表达水平高于淋巴结未转移组(χ2=7.928,P<0.01)。浸润越深,EphrinB1蛋白的表达水平越高(χ2=9.113,P<0.01)。3细胞转染结果人食管癌细胞系在转染EphrinB1后其增殖能力增强,且随着EphrinB1表达水平的升高,其癌细胞增殖能力也越来越强。结论1与正常食管组织相比,食管癌组织中EphBl高表达。EphB1 mRNA及蛋白表达与肿瘤家族史、淋巴结转移密切相关。2与正常食管组织相比,食管癌组织中EphrinB 1高表达。EphrinB1 mRNA和蛋白表达与淋巴结转移、浸润深度密切相关。3食管癌中EphB1和EphrinB 1的表达水平呈正相关,二者可能在肿瘤的发生发展过程中产生协同作用,共同调节肿瘤血管生成、肿瘤细胞增殖,侵袭及转移。4 EphrinB1的过表达增强了人食管癌细胞的生长和增殖能力。