神经性耳聋已经成为世界范围内的影响人类健康的慢性疾病。分枝肽以其稳定,无毒,低免疫原性等优点,引起了研究人员的广泛关注。多肽类药物由于其水溶性极高,所以有很短的半衰期,为解决这一问题,脂质体包裹的缓释作用引起了研究人员的关注。鉴于TNF-α在许多炎性疾病中的关键作用,尤其可能对神经性耳聋的产生具有影响,TNF-α已经作为治疗靶标被用于许多疾病的治疗当中。四分枝肽是采用分子量小且免疫原性弱的赖氨酸为核心基质,将4条抗原表位相同或不同的单体肽偶联在一起,形成树枝结构。这种设计模式不但很好的模拟天然表位构象,而且无需再偶联载体蛋白便能诱生高滴度、高亲和力的抗体,其本身没有免疫原性。有报道称同等剂量的四分枝肽的有效活力要远大于单枝肽的活力,为此,本课题研究了四分枝肽的制备方法,通过合成四分枝的TNF-α受体的竞争性配体,并试图通过脂质体的包裹,达到机体缓释的效果,为治疗神经性耳聋提供参考。1)TNF-α对神经干细胞的影响呈现出浓度依赖性的特征,其中0.1 ng/mL,0.5ng/mL,1ng/mL,5 ng/mL,10 ng/mL,20 ng/mL对其影响依次增加,但是毒副作用相对较小,40 ng/mL的TNF-α对神经干细胞的影响已经特别显著,显微镜下观察已经出现了大量的细胞凋亡的情况,证实了TNF-α对神经干细胞确实存在毒副作用,而且这种影响呈现出较强的浓度依赖性。2)合成的四种TNF-α受体的竞争性配体TRCL,纯度都达到了90%以上,而且在一定的浓度范围内,对细胞都没有毒副作用。让四种不同浓度的TRCL与40ng/mL的TNF-α共同孵育,发现只有其中A序列的肽产生了与TNF-α受体的结合,并且在一定的浓度范围内,随着A序列肽的浓度的增加,细胞活力值呈上升的趋势。3)TNF-α受体的竞争性配体TRCL peptide A序列的四分枝肽的纯度达到了90%以上,其细胞毒实验显示低毒的特性,并且其同等剂量的有效成分比单独的TRCL peptide A的有效成分更高。4)在应用探索方面,鉴于脂质体低毒,缓释,滞留时间长等特点,本课题创新性的设计实验合成包裹TRCL peptide四分枝肽的脂质体,用于药效的优化。通过测定、计算,得到纳米颗粒脂质体的包封率为81%,通过第三方检测机构的检测得到纳米颗粒脂质体的粒径为106nm,zeta电位为10.5mv,符合其制备的标准。