【摘 要】
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目的基于超高效液相色谱-质谱联用的代谢组学方法初步研究白虎汤治疗气分热证的生物标志物和解热作用机制;基于白虎汤指纹图谱和解热作用的谱效相关性研究,探究白虎汤的解热活性成分。方法白虎汤的解热作用及潜在生物标志物研究:脂多糖建立气分热证动物模型,1小时后给药白虎汤,记录实验动物体温变化情况。基于UHPLC-MS方法进行血浆代谢物检测,通过多维统计分析主成分分析法,偏最小二乘法判别分析法(PLS-DA)
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目的基于超高效液相色谱-质谱联用的代谢组学方法初步研究白虎汤治疗气分热证的生物标志物和解热作用机制;基于白虎汤指纹图谱和解热作用的谱效相关性研究,探究白虎汤的解热活性成分。方法白虎汤的解热作用及潜在生物标志物研究:脂多糖建立气分热证动物模型,1小时后给药白虎汤,记录实验动物体温变化情况。基于UHPLC-MS方法进行血浆代谢物检测,通过多维统计分析主成分分析法,偏最小二乘法判别分析法(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析法(OPLS-DA)及单维统计分析对差异代谢物进行定性、定量及代谢通路分析。对不同批次白虎汤治疗气分热证的药效学及血浆生物标志物的研究:收集不同产地、批号的药材按照正交设计法制备16批不同的白虎汤进行解热作用实验,分别取血浆采用UHPLC-MS分析,对潜在生物标记物含量变化进行研究。基于UHPLC-MS方法和灰色关联度分析方法确定白虎汤解热活性成分:对16批进行药效学评价的白虎汤进行UHPLC-MS方法分析确定其指纹图谱,并采用灰色关联分析方法确定白虎汤指纹图谱中各成分峰药效贡献大小。结果白虎汤血浆代谢组学研究确定其解热作用的潜在生物标志物有18种,注射LPS后,内源性代谢物发生变化,其中上调7种,包括胆碱、脱氧胞苷、胞苷、胞嘧啶、氧化吲哚、对甲酚、硫酸吲哚酚,下调11种,包括脯氨酸、L-瓜氨酸、L-谷氨酰胺、1-棕榈酰溶血磷脂酰胆碱、甘油磷脂酰胆碱、磷酸胆碱、胆固醇硫酸酯、DL-吲哚-3-乳酸、蒽贝素、鞘磷脂(d18:1/18:0)、环己基氨基磺酸,白虎汤可以使18种异常变化的代谢物恢复正常。16批白虎汤对气分热证均有显著的解热作用,注射LPS后,模型组18种代谢物中有16种仍符合上述变化规律,而16批白虎汤对异常变化代谢物的恢复程度不同,其中恢复最好的是cyclohexyl sulfamate,有13组白虎汤符合代谢组学规律的有谷氨酰胺和脱氧胞苷;有12组白虎汤符合代谢规律的有胆碱和吲哚-3-乳酸。灰色关联度分析确定白虎汤中26个成分对解热作用均有影响,其中有显著影响的有12个(关联度γ0,i≥0.9),有相对显著影响的有14个(0.8≤γ0,i<0.9),通过与对照品比对和文献对比,确定其影响最大的是芒果苷。结论白虎汤可以通过调整脂质代谢、氨基酸代谢、嘧啶代谢等途径,调节气分热证模型中异常变化的潜在生物标志物趋于正常起到解热作用,其解热作用的药效物质影响最大的是芒果苷。
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