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拟穴青蟹（Scylla paramamosain）系是我国东南沿海重要的海洋经济蟹类之一。卵子质量在人工育苗中的重要性越来越受到重视。一直以来,人们主要开展对甲壳动物卵子发生过程的细胞生物学研究。近年来，随着分子生物学技术的发展和广泛应用，与甲壳动物卵子发生过程密切相关的基因克隆和表达的研究成为该领域的热点，因此研究拟穴青蟹卵子发生过程中相关基因具有重要的理论意义和应用前景。本研究通过拟穴青蟹性腺EST的分析、SMART-RACE技术或RT-PCR技术克隆获Sp-vasa、卵黄膜外层蛋白1（vitelline membrane outer layer proteins1, vmo-1）、卵黄蛋白原（Vitellogenin, vtg）基因全长cDNA序列和卵黄蛋白原受体（vitellogenin receptor, vgr）的cDNA序列片段，同时采用半定量PCR和实时定量PCR技术分析各基因在各器官、卵巢各发育阶段的表达情况及Sp-vtg mRNA在肝胰腺的表达情况。结果如下：（1）Sp-vasa的cDNA序列全长2851bp，包括240bp的5’非编码区域、692bp的3’非编码区（去除polyA部分）和1896bp的开放阅读框，该开放阅读框可编码631个氨基酸，预测分子量约为68.756kDa。半定量PCR和实时定量PCR均显示，Sp-vasa基因在精巢和卵巢中特异表达，而且Sp-vasa mRNA随着卵巢的成熟表达呈下降趋势，在发育阶段卵巢的表达量高于成熟阶段（P<0.05）。（2）Sp-vmo-1的cDNA序列全长923bp，包括28bp的5’非编码区域，173bp的3’非编码区域（去除polyA部分）和693bp的开放阅读框，该开放阅读框可编码231个氨基酸，预测分子量约为24.782kDa。半定量PCR和实时定量PCR均显示，Sp-vmo-1基因只在卵巢中表达，且Sp-vmo-1mRNA在第Ⅰ和Ⅳ期卵巢表达量高于比其它期的表达量。（3）Sp-vtg的cDNA序列全长7816bp，包括19bp的5’非编码区域，90bp3’非编码区（除去polyA部分）和7683bp开放阅读框，该开放阅读框可编码2560个氨基酸，预测其蛋白质的分子量为287.743kDa。半定量PCR和实时定量PCR均显示，Sp-vtg基因在卵巢和肝胰腺特异表达，而且在肝胰腺中Sp-vtg基因的表达量高于在卵巢中的表达量（P<0.05）；Sp-vtg mRNA随着卵巢的成熟表达呈升高趋势；Sp-vtg mRNA在肝胰腺中的表达量随着性腺成熟指数的升高而升高，到第Ⅳ期以后表达处于稳定阶段。（4）Sp-vgr基因部分cDNA序列747bp，该序列包括203bp3’非编码区（除去polyA部分）。Sp-vgr基因只有在卵巢中特异表达。Sp-vgr mRNA随着卵巢的成熟表达呈先升高后降低的趋势，在第Ⅱ期达到最高。本研究同时也采用原位杂交技术分析各基因在卵子发生过程中的定位表达情况，结果表明：1）Sp-vasa mRNA在第Ⅰ期定位在卵母细胞胞质中，在第Ⅲ期定位在滤泡细胞和卵母细胞核周围，而在第Ⅴ期主要定位在卵母细胞核周围，而且在第Ⅰ、Ⅲ期的杂交信号明显高于第Ⅴ期；2）Sp-vmo-1mRNA在第Ⅰ期主要定位在滤泡细胞中，在第Ⅲ期除定位在滤泡细胞外，在卵母细胞核内也有信号，在第Ⅴ期主要定位在细胞核，而且Sp-vmo-1mRNA在第Ⅰ期的杂交信号明显高于第Ⅲ和Ⅴ期；3）Sp-vtg mRNA在卵子发生过程中呈由弱到强的趋势，而且在第Ⅰ期主要定位在卵母细胞胞质中，在第Ⅲ期主要定位在卵母细胞的核周围中，在滤泡细胞也有微弱的杂交信号，在第Ⅴ期主要定位在卵母细胞核内；Sp-vtg mRNA在肝胰腺各期主要定位在肝胰腺的细管（T）中，而且杂交信号呈由弱到强的趋势，特别在第Ⅴ期有相当强的信号。4）Sp-vgr mRNA在第Ⅰ期主要定位在卵母细胞胞质中，在第Ⅲ期主要定位在卵细胞的核中，在滤泡细胞也有信号，在第Ⅴ期主要定位在细胞核内，而且Sp-vgr mRNA在第Ⅲ期的杂交信号明显高于第Ⅰ和Ⅴ期。