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目的：应用顺铂(Cisplatin，DDP)浓度梯度递增法建立人舌鳞癌顺铂耐药细胞系 CAL-27/DDP，并检测和评价其生物学特性，为口腔癌的临床治疗提供理想的体外研究模型。 方法：采用顺铂浓度梯度递增法，历时12个月建立了舌鳞癌CAL-27顺铂耐药细胞系CAL-27/DDP。用倒置显微镜进行形态学观察；用噻唑蓝（MTT）比色法检测顺铂对亲本细胞系（CAL-27）和耐药细胞系（CAL-27/DDP）的IC50值及耐药指数（RF)和耐药保持性，细胞抑制率=（1-耐药细胞平均吸光度值/亲本细胞平均吸光度值）×100％,耐药指数（RF)=IC50（CAL-27/DDP）/IC50（CAL-27）；用流式细胞术检测亲本细胞系（CAL-27）和耐药细胞系（CAL-27/DDP）细胞周期比例的改变和细胞周期分布情况；用RT-PCR法检测两组细胞系多药耐药基因（MDR1）的mRNA表达情况；用Western-blot法检测耐药相关蛋白P糖蛋白（P-gp）的表达情况。 结果：（1）采用药物浓度梯度递增法持续给药诱导，连续培养12个月后，耐药细胞能够在含1mg/lDDP的培养液中稳定生长。（2） MTT结果：耐药细胞较亲本细胞的IC50值及耐药指数均有所增加，对顺铂的耐药性增强，增加到18.09±0.30倍；耐药细胞系较亲本细胞系生长速度减慢,其细胞倍增时间由45.12±0.32小时增加到54.43±1.04小时，增加了9.31±0.98小时。可见CAL-27/DDP耐药细胞系群体倍增时间较CAL-27亲本细胞系明显延长（P＜0.01）。细胞脱离培养1个月的耐药保持性为95.63%±0.03%,细胞脱离培养3个月的耐药保持性为91.9%±0.03%，细胞脱离培养6个月的耐药保持性为83.82%±0.03%。（3）细胞形态学观察：耐药细胞体积较亲本细胞体积大，常呈克隆聚集现象，细胞形态由“铺路石”样变化到“多角”型，CAL-27/DDP细胞核仁变大，有的细胞出现“多核”现象，细胞内颗粒增多，胞质浓缩，出现“空泡性”变。（4）细胞周期：流式细胞术检测到耐药细胞与亲本细胞相比，G1期和G2期比例减少，S期比例增加，耐药细胞DNA复制期明显延长（P＜0.01），细胞对数生长期的增殖速度减慢。（5）RT-PCR：RT-PCR测得耐药细胞的MDR1阳性表达明显高于亲本细胞，亲本细胞的MDR1mRNA为0.3±0.01，耐药细胞的MDR1mRNA为0.5±0.02，与亲本细胞相比，耐药细胞MDR1mRNA相对表达量明显增高（P<0.01)（6）western-blot:亲本细胞系的P-gp蛋白的表达的灰度与其对应的内参GAPDH的灰度比值最大为0.33，最小为0.28，平均为0.31±0.03。耐药细胞系的P-gp蛋白的表达的灰度比值最大为0.98，最小为0.95，平均为0.96±0.02。两者比较有显著差异(P<0.01)。 结论：1、通过顺铂低浓度加量持续诱导法，逐渐诱导出耐药细胞系,最终在顺铂浓度为1mg/l的培养液中稳定生长并传代，建立了人舌鳞癌细胞顺铂耐药细胞系（CAL-27/DDP）。2、CAL-27/DDP细胞系细胞形态、群体倍增时间、细胞周期变化显著。MDR1基因在耐药细胞中的表达较亲本细胞增强，P-gp的表达增多,证明:MDR1基因编码和其编码的P-gp蛋白可能参与了细胞对顺铂的耐药。3、CAL-27/DDP细胞系是源于 CAL-27亲本细胞的耐药细胞系，具有耐药性。CAL-27/DDP细胞系能够用于口腔癌术后化疗耐药机制的探讨，并可以进一步作为研究口腔癌逆转耐药的重要的体外模型。