蛹虫草新型黄色素的分离纯化与结构鉴定及其性质功能研究

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蛹虫草是一种重要的食药两用菌,富含核苷类、虫草多糖和水溶性类胡萝卜素等多种生物活性成分,具有多种药用功效,如抗炎、抗肿瘤、抗衰老等。蛹虫草菌株在固体、液体培养基发酵培养条件下,当受到充足的光照刺激,子实体、菌丝的颜色皆会发生改变,由白色转变为橙黄色。近年来,对蛹虫草子实体黄色素的研究发现了6种类胡萝卜素,其中4种为具有较强水溶性的cordyxanthins。相较于传统的脂溶性类胡萝卜素,这4种天然水溶性类胡萝卜素较易被人体消化吸收,理论上也具有更强的潜在药用活性。为了对蛹虫草黄色素作进一步的开发利用,并研究黄色素潜在的功能活性,本文利用高效液相色谱法作为分离纯化方法,结合4大光谱(UV-vis、FTIR、HRMS、NMR)对黄色素结构进行鉴定,旨在开发具有新型结构的蛹虫草黄色素,并进一步探究新型色素的功能活性。本文的主要研究结果如下:(1)建立了高效的蛹虫草黄色素分离纯法方法,洗脱时间14 min内实现了蛹虫草黄色素的成功分离,并利用制备型HPLC对4号、5号峰进行制备收集,分别命名为CMPP-1、2号,结果表明2个纯化色素的纯度均>95%。(2)响应面优化蛹虫草CMPP-2的最佳提取条件为:乙醇浓度57.68%、提取温度44.40℃、提取时间52.44 min,实际测定CMPP-2的提取量为2259.23±83.98μg/g,提取级数确定为3级。(3)成功鉴定CMPP-2分子结构,并将其命名为虫草烯(cordycepene)。虫草烯在278、449和477 nm处检测到最大吸收波长,分子量大小为263.1158 m/z,分子式为C14H17N1O4,是一种具有全新结构的新型色素。(4)研究了虫草烯的稳定性。结果表明,不同光照与空气对虫草烯稳定性影响的顺序为:紫外光>自然光>空气;高温(>40℃)对虫草烯稳定性影响明显;Fe3+对虫草烯具有保护作用,K+、Na+、Ca2+对虫草烯影响较小;不同p H值对虫草烯稳定性影响的顺序为:1>3>13>11>5>9>7;常用食品添加剂对虫草烯稳定性的影响结果表明,高浓度(1.5%)的强酸味剂柠檬酸和防腐剂以及氧化还原剂对虫草烯稳定性影响较大。(5)研究了虫草烯抗氧化活力。结果表明,虫草烯的DPPH自由基清除活力明显高于粗提物。当虫草烯的浓度增加至2 mg/m L时,虫草烯的DPPH自由基清除活性与对照组Vc接近。不同浓度(0-50μg/m L)的虫草烯对正常HSF细胞没有任何细胞毒性作用,浓度高于25μg/m L的虫草烯具有修复衰老HSF细胞的能力。同时,虫草烯会显著增加衰老HSF细胞胞内抗氧化酶活性(SOD,GSH-Px和CAT)并降低MDA水平,并且具有剂量依赖性。
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