急性呼吸窘迫综合征(Acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是急性肺损伤(Acutelunginjury，ALI)最严重的阶段，是在肺内外一系列严重疾病影响下，发生的以肺泡毛细血管损伤为主要表现的临床综合征。ARDS是一个动态的疾病，可迅速进展至具有不同临床病理生理特征、不同治疗需要的几个阶段。ARDS晚期间质纤维增殖异常，若未被抑制，将进展为纤维变性的肺损伤，间质细胞及其产物沿着新生血管的管壁充满肺泡腔。组织学分析发现，伴随着成纤维细胞聚积，它们在空腔、间质、呼吸性细支气管和腺泡内微血管壁产生大量结缔组织产物，形成纤维化肺泡炎。纤维化肺泡炎与死亡率的增加相关，因此而死亡的患者尸检发现肺部有胶原和纤维结合素的显著累积。研究表明，纤维增殖异常是15％～40％的ARDS未存活患者的主要致死原因，而且还是其余未存活患者发生致命性脓毒血症及相关多器官功能衰竭的促发因素，肺纤维化成为影响ARDS患者抢救成功率及预后的主要因素，因此，关于肺纤维化形成机制及有效干预治疗的研究非常重要。 目前，糖皮质激素为治疗ARDS肺纤维化的唯一手段。但是，由于糖皮质激素可引起多种副作用，特别是其对机体炎症和防御反应的广泛抑制，造成机体对多种病原体的易感性，可诱发或加重感染的发生。然而，ARDS患者常常存在严重感染，感染不仅是ARDS的诱因，而且是ARDS常见的并发症。ARDS病程超过7天时，几乎100％的患者合并感染。这就在很大程度上限制了糖皮质激素在ARDS肺纤维化患者中的应用。因此，有必要寻求一种更为安全有效的防治ARDS肺纤维化的措施。 本课题从ARDS肺纤维化的发生机理出发，力图在细胞水平探究抑制氧自由基损伤对ARDS肺纤维化的阻断作用，以寻求新的防治ARDS肺纤维化的有效途径。 目的从细胞水平研究脂多糖所致氧自由基损伤对肺纤维化形成的影响，观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对氧自由基损伤以及ARDS肺纤维化的影响，比较N-乙酰半胱氨酸与地塞米松(DEX)二者的作用有无差异。 研究方法胶原含量是肺纤维化程度的重要指标。肺内胶原85％由肺成纤维细胞产生，因此本实验以体外培养的人胚肺成纤维细胞做为研究对象，将其分为四组，依次为：空白对照组；脂多糖处理组，用于模拟ARDS的细胞模型，观察脂多糖对ARDS肺纤维化的影响；N-乙酰半胱氨酸加脂多糖处理组，观察N-乙酰半胱氨酸对脂多糖所致肺纤维化的影响；地塞米松加脂多糖组，做为治疗对照组，观察地塞米松对脂多糖所致肺纤维化的影响，并比较N-乙酰半胱氨酸与地塞米松二者的作用有无差异。 四组细胞体外培养约24小时后，提取细胞内总蛋白，使用考马斯亮兰法测定细胞内总蛋白含量，Sircol胶原测定试剂盒测定细胞内胶原蛋白含量，根据细胞内胶原蛋白含量在细胞内总蛋白含量中比例的变化，比较几种处理因素对肺纤维化的影响。 为进一步明确几种处理因素影响肺纤维化的机理，使用还原型谷胱甘肽测定(γ-glutamylcysteinylglycine，GSH)试剂盒测定细胞内GSH含量的变化——GSH含量变化是细胞氧自由基损伤程度的重要指标。根据细胞内GSH含量在细胞内总蛋白含量中比例的变化，比较几种处理因素对肺成纤维细胞氧自由基损伤的影响，从而明确氧自由基损伤在ARDS肺纤维化发病过程中所起的作用。 统计学分析，数据以均数±标准误表示，样本均数的差异显著性检验使用方差分析，P＞0.05表示无显著性差异，P＜0.05表示有显著性差异。 结果1.与空白对照组相比，LPS可明显诱导肺成纤维细胞产生胶原(P=0.022)及细胞内GSH含量减少(P=0.011)。 2.NAC明显抑制LPS所诱导的肺成纤维细胞胶原产生(P=0.012)以及细胞内GSH含量减少(P=0.008)。 3.DEX明显抑制LPS所诱导的肺成纤维细胞胶原产生(P=0.041)以及细胞内GSH含量减少(P=0.028)。 4.NAC与DEX在抑制LPS所诱导的肺成纤维细胞胶原产生(P=0.563)以及细胞内GSH含量减少(P=0.540)方面的作用无显著差异。 结论1.脂多糖可诱导肺成纤维细胞胶原产生增加及细胞内还原型谷胱甘肽含量减少。 2.N-乙酰半胱氨酸可明显抑制脂多糖所诱导的肺成纤维细胞胶原产生及细胞内还原型谷胱甘肽含量减少。 3.地塞米松可明显抑制脂多糖所诱导的肺成纤维细胞胶原产生及细胞内还原型谷胱甘肽含量减少。 4.N-乙酰半胱氨酸与地塞米松二者的作用无差异。