PCR-反向点杂交法在外阴阴道念珠菌病中的应用评估

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目的:  评价深圳亚能念珠菌菌种鉴定及白色念珠菌耐药基因突变检测试剂(PCR-反向点杂交法)用于外阴阴道念珠菌病(VVC)诊断及辅助药物选择的有效性和可行性。  方法:  选择梅里埃酵母菌鉴定卡试剂盒、郑州安图真菌快速培养鉴定药敏试剂盒分别作为念珠菌菌种鉴定和白色念珠菌耐药检测的金标准,核酸序列测定作为白色念珠菌耐药基因突变检测的对比方法,同时检测335例临床样本。其中酵母菌鉴定卡试剂盒验证考核试剂的念珠菌菌种鉴定的灵敏度和特异性;真菌快速培养鉴定药敏试剂盒验证PCR-反向点杂交法的白色念珠菌耐药检测的灵敏度和特异性;进行耐药突变位点的核酸序列测定,验证PCR-反向点杂交法白色念珠菌耐药基因突变检测位点的准确性。同时对PCR-反向点杂交法进行性能评价。  结果:  与培养鉴定法相比,考核试剂检测6种念珠菌菌种的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为95%、96%、96%、98%、97%以上,2种方法检测6种念珠菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌)结果的差异无统计学意义(χ2值分别为0.44、0、0、0、0和0,P均>0.05),一致性较好(Kappa均>0.9)。与药敏培养法相比, PCR-反向点杂交法检测白念珠菌耐药的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为98%、88%、98%、88%和96%,2种方法检测结果的差异无统计学意义(χ2=0.17,P>0.05),一致性较好(Kappa>0.8)。PCR-反向点杂交法与核酸序列测定相比,对6种白念珠菌耐药基因突变位点的检测结果完全一致。PCR-反向点杂交法能稳定检出的念珠菌DNA的最低检测限为1.0×104 copies/mL;重复检测念珠菌菌种和白色念珠菌耐药基因类型,结果一致,显色均一;对12种检测范围外的念珠菌阴性DNA样本和5种检测范围外的其它念珠菌DNA样本无交叉反应。  结论:  PCR-反向点杂交法与金标准培养法和核酸序列测定相比,在念珠菌菌种鉴定、白色念珠菌耐药基因突变检测有较高一致性,是有效的念珠菌检测方法,比传统检测方法更快速更早期,可广泛应用于VVC的辅助诊断与治疗。
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