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目的体外成功培养肌源性干细胞(muscle derived stem cells,MDSCs),并对其进行鉴定。脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠分组行干细胞移植后,定期对脊髓损伤动物BBB评分及运动诱发电位(Motor evoeked potentials,MEP)检测,了解脊髓损伤大鼠的恢复情况,追踪移植的MDSC在体内的分布及成活情况,TUNEL检测脊髓组织中神经细胞的凋亡情况,RT-PCR半定量分析各组动物体内脑源性神经生长因子(BDNF)及Bcl-2、Bax的基因表达水平。观察肌源性干细胞移植对大鼠脊髓损伤模型的影响。方法取新生SD大鼠骨骼肌组织,提取分离出MDSCs,在体外培养并鉴定。细胞传至第4代时以Brdu标记。以改良Allen法复制成年大鼠胸段脊髓损伤模型,为研究细胞移植治疗脊髓损伤的疗效判定提供可靠的动物模型。采用随机分组的方法将60只大鼠分为三组:A组:实验组(n=24)脊髓损伤后第7天于脊髓原损伤部位注入MDSCs浓度为1×105/ul的培养液10μl。B组:对照组(n=24)脊髓损伤后第7天于脊髓原损伤部位注入不含MDSCs培养液10μl。C组:假手术组(n=12)只切除锥板,不予损伤脊髓。各组大鼠脊髓损伤术后1周、2周、3周、4周时分别行BBB行为学评分和电生理检测,四周后实验动物全部处死,行病理学检查及免疫组织化学染色,观察移植MDSCs在大鼠体内的存活情况。RT-PCR半定量分析BDNFmRNA水平,观察MDSCs对BDNF表达的影响。检测BAX、Bcl-2的表达,TUNEL检测细胞凋亡情况,从而论证MDSCs对脊髓损伤后微环境的修复作用。结果1.本实验中,以混合酶消化法从SD大鼠乳鼠骨骼肌组织获得高活力、高纯度的MDSCs, Desmin免疫组化染色进行了初步鉴定。2.MDSCs移植组后肢功能恢复明显,组织形态学观察发现移植的干细胞在体内大部分仍存活,大部分集中与脊髓原损伤部位。TUNEL检测MDSCs移植组细胞凋亡明显少于对照组。3.脊髓损伤4周后RT-PCR半定量分析脑源性神经生长因子(BDNF)、Bcl-2及Bax基因表达水平,结果显示:实验组BDNF、Bcl-2表达高于对照组,Bax表达低于对照组。从分子生物学水平证明MDSCs对脊髓损伤的修复作用。结论将体外分离培养的肌源性干细胞定向移植于原脊髓损伤中心部位, MDSCs移植后,实验组动物神经功能有一定的恢复。肌源性干细胞移植4周后多数存活,并集中于脊髓损伤部位,干细胞移植后改善了体内的微环境,促进了体内BDNFmRNA及BCL-2的表达,抑制BAX的表达,从而抑制了神经细胞的凋亡,促进脊髓损伤的修复。