猪呼吸与繁殖综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRS virus,PRRSV)感染引起的,以母猪流产、死胎等生殖障碍和仔猪呼吸疾病等为特征的急性传染病,每年都给全球养殖业带来巨大的损失。PRRSV分子有多个结构蛋白,与病毒的粘附、感染等过程均有紧密关联。目前RPPSV的确切致病机制尚无定论。已有研究显示,PRRSV的主要感染通道是攻击巨噬细胞,特别是肺泡巨噬细胞。通常PRRSV先与细胞膜上受体结合再经过内吞作用侵染到细胞内部。现已知巨噬细胞上主要有三种受体参与PRRSV的粘附、内吞、脱衣壳等过程,分别是硫酸乙酰肝素(heparan sulphate,HS)、唾液酸粘附素(Sialoadhesin,Sn)和CD163。其中Sn是介导PRRSV内吞的主要受体,将Sn基因转染至PRRSV的非受纳细胞系后即可导致病毒感染。因此研究Sn的结构和功能对深入了解RPPSV的致病机理有重要意义。Sn是位于巨噬细胞膜上的跨膜蛋白,大部分结构域的功能仍有待研究。制备相关抗原决定簇或结构域的抗体对研究Sn在介导病毒感染和受体间的相互作用是十分必要的。本实验通过DNAstar软件分析了Sn基因编码序列抗原性指数,从N端胞外区选取了由114个氨基酸残基组成的多肽片段(Sn114)作为预期抗原,并根据大肠杆菌偏爱的密码子优化了编码基因。将Sn114基因连接到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点上,构建成上游融合硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx),下游融合6×His-tag的融合表达载体pET-32a-Sn114。将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达重组Sn114融合蛋白,再使用Ni-NTA Agarose纯化表达产物。将纯化的Sn114蛋白免疫家兔后收获血清抗体,ELISA法测定抗体效价,并通过Western-blot和巨噬细胞结合试验检测抗体对完整Sn蛋白和巨噬细胞的识别、结合能力。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,重组Sn114融合蛋白确实得到了高效表达和理想的纯化效果。免疫34 d后血清抗体的滴度达到了1: 10 240。抗体的特异性检测结果表明,抗体能识别完整的Sn蛋白,并能与巨噬细胞特异性结合。综上所述,Sn抗原表位蛋白Sn114得到了表达,本实验制备的Sn多克隆抗体具有良好的生物活性和特异性,这为以后研究Sn在病毒感染中的作用机制提供了必要条件。