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多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）是育龄妇女最常见的一种极为复杂的内分泌紊乱综合征,以雄激素过多及持续无排卵为特征,发病率占育龄妇女的5%～10%。1935年由Stein和Leventhal两位学者首先发现,当时称之为S—L综合征。传统上认为PCOS的特点为过多雄激素、无排卵、不孕、多毛、肥胖和子宫内膜癌风险,随着临床实践及实验研究的深入,最近认识到PCOS不仅涉及生殖系统,而且是一种代谢综合征,常发生高胰岛素血症、高血脂、糖尿病和心血管疾病,在治疗上涉及月经失调、生育问题、子宫内膜增生、远期代谢合并症等多学科问题。其发病机制目前还不清楚,是当前妇科内分泌领域研究的一个难点和热点。卵巢中的卵泡处于无血管的微环境中,在卵泡发育过程中,卵母细胞发育所需营养以及与外界的信号交流都要通过卵母细胞与周围颗粒细胞以及颗粒细胞与膜细胞之间的细胞连接来实现。间隙连接是普遍存在于相邻细胞间的细胞连接方式,它由一组名为间隙连接蛋白（connexin,Cx）的膜蛋白组成。间隙连接介导卵泡细胞间的代谢交换,传递内分泌和旁分泌的信息物质,因而卵泡细胞间的间隙连接对于卵泡的发育、卵母细胞的成熟、以及甾类激素的分泌,都具有十分重要的意义。Cx43和Cx37是许多物种卵巢间隙连接中数量最丰富的两种连接蛋白,与卵泡发育的关系最为密切。它们在卵子发生和卵泡发育中必不可少的作用已经确立。据报道,Cx43与肿瘤、分娩、心血管疾病及神经系统、骨骼系统疾病均有一定关系。另外,它还参与了凋亡、炎症等过程。国内外对Cx43的研究多集中在肿瘤和心血管系统。近年来对Cx43在卵巢发育中的作用研究也逐渐增多和深入。有研究显示,在正常卵巢中,Cx43似乎担当了一个抑癌因子的作用。它与卵巢肿瘤的发生密切相关。通过基因敲除小鼠研究显示,Cx43的缺失导致了卵子发生、卵泡发育、排卵、和早期胚胎发育的严重受损。它从以下几个环节影响卵泡发育:对原始生殖细胞迁移和胚胎卵巢发育起关键作用;它保证了颗粒细胞的正常增殖和分层,维持了卵泡的正常发育和结构;抗颗粒细胞凋亡,利于卵泡选择;在卵母细胞减数分裂的恢复中起重要作用。另外,在卵巢重塑的关键时期:排卵、黄体形成、分化和退化中也起重要作用。许多激素及细胞因子如黄体酮、促黄体生成激素、促卵泡激素、生长激素等在转录、翻译和表达等水平通过影响Cx43通道的开放、关闭时间,或使其磷酸化进行调节。在卵巢中,Cx37主要表达在卵母细胞与周围颗粒细胞之间的间隙连接中,构成了二者物质交流的通道。有研究报道,Cx37在卵泡发育早期缺失,导致了卵泡发育停滞在窦前阶段,窦状卵泡较少;黄体化过程提前,卵母细胞过早停止发育,不能进行减数分裂;促性腺激素不能诱导卵泡发育成熟并排卵。因临床取材困难,目前常用大鼠模型来进行PCOS发病机制的研究。本研究通过建立来曲唑诱导的PCOS大鼠模型,应用免疫组化方法观察Cx43和Cx37在正常及多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达变化,从而探讨PCOS的发病机制。材料与方法1研究对象及分组选择6周龄清洁级雌性SD大鼠60只,所有大鼠由郑州大学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK（豫）2005—0001,随机分为实验组、实验对照组和空白对照组,每组20只。2方法2.1 PCOS模型的建立实验组大鼠灌胃服用溶于1%羧甲基纤维素（carboxmethlycellulose,CMC）的来曲唑1mg.（kg.d）-1,实验对照组灌胃服用等容积的1%CMC,实验组和实验对照组均连续灌服21天;空白对照组不给以任何刺激,正常饲养21天。此期所有大鼠须每日做阴道脱落细胞涂片巴氏染色后镜检监测其动情周期的变化。2.2大鼠标本采集2.2.1实验组大鼠在第21天应用来曲唑24h（并禁食12h）后处死取标本。2.2.2实验对照组和空白对照组在饲养21天并禁食12h后处死取标本。2.2.3所有大鼠缺血法致死,取大鼠心脏血5ml,2000r/min离心10min,收集血清,-20℃冻存备用。取出大鼠卵巢和子宫,分别称重并记录后,固定于福尔马林中备用。2.3大鼠卵巢组织学检查以卵巢最大平面作为待检平面行石蜡包埋,每个石蜡块分别以4μm厚度连续切片两次（间隔40μm）,行苏木素-伊红（HE）染色。2.4大鼠血清性激素测定应用RIA法测定促黄体生成激素（luteinizing hormone,LH）、促卵泡激素（follicle stimulating hormone,FSH）、雌二醇（estradiol,E2）、孕酮（progesterone,P）、睾酮（testoterone,T）,以评定内分泌改变。2.5大鼠卵巢组织中Cx43和Cx37的表达2.5.1应用免疫组化SP法进行组织染色,按照试剂盒说明书进行。2.5.2免疫组化染色结果判定标准:以PBS替代一抗作为阴性对照,以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性结果。阳性细胞必须符合下列要求:镜下组织细胞结构清楚;阳性颗粒定位好;染色明显高于背景。2.5.3拍片及测灰度值:拍摄免疫组化染色照片并保存。每张切片随机观察5个高倍镜视野,采用Biosens Digital Imaging System系统进行图像灰度值分析。2.6统计学方法采用SPSS11.5统计软件进行统计学分析,所有数据均以（?）±s表示,多组均数之间的比较采用单因素方差分析,以a=0.05作为检验水准。结果1 PCOS大鼠模型1.1大鼠动情周期的变化:实验组大鼠在应用来曲唑12天后动情周期失去规律性变化,均处于动情间期时相,提示无排卵;实验对照组和空白对照组大鼠仍保持4天规律的动情周期。1.2大鼠卵巢、子宫大体观及组织学改变:实验组大鼠卵巢表面较苍白,体积增大;实验对照组和空白对照组大鼠卵巢色泽较红;实验组大鼠卵巢重量显著高于实验对照组及空白对照组（P＜0.05）。HE染色镜检,实验组大鼠卵巢膜细胞层增厚,沿增厚的白膜下含有很多处于不同期的各级卵泡和闭锁卵泡,囊状扩张卵泡明显增加;间质细胞明显增生,未见排卵前卵泡及排卵迹象,黄体罕见;实验对照组和空白对照组大鼠卵巢可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,卵泡内颗粒细胞呈多层,仍有排卵。实验组大鼠子宫重量显著低于实验对照组及空白对照组（P＜0.05）。1.3鼠血清性激素测定:实验组大鼠血清T、LH浓度显著高于实验对照组及空白对照组（P＜0.05）;实验组大鼠血清FSH、E2、P浓度显著低于实验对照组及空白对照组（P＜0.05）。2大鼠卵巢组织中Cx43和Cx37的表达在卵巢中Cx43主要在颗粒细胞间表达,在实验组大鼠卵巢中表达水平显著低于实验对照组和空白对照组（P＜0.05）。卵巢中Cx37主要在卵母细胞与周围颗粒细胞间表达,在实验组大鼠卵巢中表达水平显著低于实验对照组和空白对照组（P＜0.05）。结论1应用来曲唑诱导的PCOS大鼠模型,与人类的PCOS相似,是理想的研究PCOS的动物模型。2 Cx43和Cx37在PCOS大鼠模型卵巢中表达下调,可能参与了PCOS卵泡发育障碍的致病环节。