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目的:
肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症。肺腺癌约占肺癌总数的50%,患者的5年生存率仅15%-20%。环状RNA(Circular RNA, circRNA)是一类内源性共价闭合的环形RNA分子,作为近年来肿瘤研究中的一大热点,circRNA能够调控基因表达,影响多种肿瘤的发生及发展。环状RNAZNF292(Circular RNA of zinc finger protein 292, cZNF292)在神经胶质瘤、肝癌和食道癌中发挥一定的调控作用,但其在肺腺癌中的作用及相关机制尚无报道。目前肺腺癌的治疗手段较少且效果有限。因此深入了解肺腺癌的发生发展机制,寻找肺腺癌新的治疗靶点具有深远的意义。本论文旨在对cZNF292在肺腺癌中的功能和作用机制进行初步探索。
方法:
采用qRT-PCR检测人肺腺癌细胞系与正常人支气管上皮细胞系中cZNF292的表达量。采用MTT法、划痕愈合实验、Transwell小室实验和流式细胞术等,检测特异性敲减cZNF292对肺腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡等不同生物学过程的影响。通过RNAFISH检测cZNF292的细胞定位,并采用Westernblot检测cZNF292的作用机制。下载TCGA中的肺腺癌临床组织样本数据、GEO中的肺腺癌相关数据集,考察ZNF292的mRNA表达与肺腺癌的临床相关性。利用shRNA研究敲减ZNF292对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。
结果:
与人正常支气管上皮细胞相比,cZNF292的表达水平在肺腺癌细胞PC9和HCC827中显著升高。在PC9和HCC827中,沉默cZNF292可显著抑制细胞增殖,且引起细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡。沉默cZNF292后,CDK6、CDK4和CDK2蛋白表达下调,同时,凋亡相关蛋白cleavedcaspase3和cleavedcaspase9蛋白表达上调。此外,cZNF292主要位于细胞核。沉默cZNF292能够引起ZNF292蛋白表达上调。分析TCGA和GEO的肺腺癌相关数据集发现,ZNF292在肺腺癌肿瘤组织中的mRNA表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,且与疾病进展、总体生存期存在显著性关联。在PC9细胞中,敲减ZNF292可以显著促进细胞增殖、迁移和侵袭能力,并引起细胞周期进程加快。与沉默cZNF292相反,敲减ZNF292可上调CDK6、CDK4和CDK2的蛋白表达。
结论:
cZNF292在肺腺癌细胞系中促进细胞增殖。ZNF292在肺腺癌细胞系中抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。cZNF292可能通过调节ZNF292蛋白水平发挥作用。cZNF292与ZNF292对肺腺癌的调控机制的研究可为新药开发提供潜在靶点或为肺腺癌治疗策略的改进提供理论指导。
肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症。肺腺癌约占肺癌总数的50%,患者的5年生存率仅15%-20%。环状RNA(Circular RNA, circRNA)是一类内源性共价闭合的环形RNA分子,作为近年来肿瘤研究中的一大热点,circRNA能够调控基因表达,影响多种肿瘤的发生及发展。环状RNAZNF292(Circular RNA of zinc finger protein 292, cZNF292)在神经胶质瘤、肝癌和食道癌中发挥一定的调控作用,但其在肺腺癌中的作用及相关机制尚无报道。目前肺腺癌的治疗手段较少且效果有限。因此深入了解肺腺癌的发生发展机制,寻找肺腺癌新的治疗靶点具有深远的意义。本论文旨在对cZNF292在肺腺癌中的功能和作用机制进行初步探索。
方法:
采用qRT-PCR检测人肺腺癌细胞系与正常人支气管上皮细胞系中cZNF292的表达量。采用MTT法、划痕愈合实验、Transwell小室实验和流式细胞术等,检测特异性敲减cZNF292对肺腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡等不同生物学过程的影响。通过RNAFISH检测cZNF292的细胞定位,并采用Westernblot检测cZNF292的作用机制。下载TCGA中的肺腺癌临床组织样本数据、GEO中的肺腺癌相关数据集,考察ZNF292的mRNA表达与肺腺癌的临床相关性。利用shRNA研究敲减ZNF292对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。
结果:
与人正常支气管上皮细胞相比,cZNF292的表达水平在肺腺癌细胞PC9和HCC827中显著升高。在PC9和HCC827中,沉默cZNF292可显著抑制细胞增殖,且引起细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡。沉默cZNF292后,CDK6、CDK4和CDK2蛋白表达下调,同时,凋亡相关蛋白cleavedcaspase3和cleavedcaspase9蛋白表达上调。此外,cZNF292主要位于细胞核。沉默cZNF292能够引起ZNF292蛋白表达上调。分析TCGA和GEO的肺腺癌相关数据集发现,ZNF292在肺腺癌肿瘤组织中的mRNA表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,且与疾病进展、总体生存期存在显著性关联。在PC9细胞中,敲减ZNF292可以显著促进细胞增殖、迁移和侵袭能力,并引起细胞周期进程加快。与沉默cZNF292相反,敲减ZNF292可上调CDK6、CDK4和CDK2的蛋白表达。
结论:
cZNF292在肺腺癌细胞系中促进细胞增殖。ZNF292在肺腺癌细胞系中抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。cZNF292可能通过调节ZNF292蛋白水平发挥作用。cZNF292与ZNF292对肺腺癌的调控机制的研究可为新药开发提供潜在靶点或为肺腺癌治疗策略的改进提供理论指导。