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家蚕（Bombyx mori）是一种具有重要经济价值的鳞翅目模式昆虫。引起家蚕致病的病原有很多种,家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）是其中危害较为严重的一种。蚕业生产中,使用化学药剂进行消毒的传统方法预防蚕病具有很大的局限性,培育抗性品种成为了防治蚕病的一种有效方法。近年来许多研究人员对家蚕抗性品种的培育开展了很多的研究,但是培育抗性品种的常规方法存在周期长、效率低等缺点。RNAi是生物体中普遍存在的一种现象,并且在昆虫防治中已经得到广泛的应用,利用RNAi结合转基因技术有望提高家蚕对BmNPV的抗性。研究表明ie1、gp64和ie0基因在BmNPV增殖复制的过程中起着重要的作用,本研究将ie1基因的1-545 bp、gp64基因的1-507 bp和ie0基因的1-525 bp区域以反向串联的方式连接,构建能够在细胞体内稳定转录产生ds RNA的转移载体pF-A3-die1-IM、pF-A3-dgp64-IM、pU-A3-die0-IG和pF-A3-die1-dgp64-IM,利用Invasin介导的DAP营养缺陷型E.coli BmMultiBac/△asd Sw106/PGB2ΩInv菌株构建重组菌株rSw106-Bm-pF-A3-IM、rSw106-Bm-pF-A3-die1-IM、rSw106-Bm-pF-A3-dgp64-IM、rSw106-Bm-pF-dA3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG、rSw106-Bm-pF-dA3-die1-dgp64-IM、rSw106-Bm-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG、rSw106-Bm-pU-A3-die0-IG和rSw106-Bm-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG。用重组菌株侵染BmN细胞,利用杆状病毒多基因表达系统获得重组杆状病毒BmBV-pF-A3-IM、BmBV-pF-A3-die1-IM、BmBV-pF-A3-dgp64-IM、BmBV-pU-A3-die0-IG、BmBV-pF-A3-die1-dgp64-IM、BmBV-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG、BmBV-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG和BmBV-pF-A3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG。TCID50法测定重组杆状病毒滴度,将重组病毒稀释101、102和103倍后注射5龄1 d家蚕幼虫,24 h观察一次,并记录结果。结果分析显示,注射10-1的重组病毒后,实验组家蚕幼虫的发病时间和死亡时间比阳性对照组推迟了24 h,注射病毒BmBV-pF-A3-dgp64-IM后家蚕幼虫死亡率比阳性对照组降低了10%。注射10-2的重组病毒后,实验组家蚕幼虫的发病时间和死亡时间比阳性对照组推迟了24 h,注射病毒BmBV-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG后家蚕幼虫发病率比阳性对照组降低了10%,注射病毒BmBV-Sw106-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG、BmBV-Sw106-pF-A3-die1-IM、和BmBV-Sw106-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG后家蚕幼虫死亡率比阳性对照组降低了10%,注射病毒BmBV-pF-A3-dgp64-IM后家蚕幼虫死亡率比阳性对照组降低了20%。注射10-3稀释浓度的重组病毒BmBV-Sw106-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG、BmBV-Sw106-pF-A3-die1-dgp64-IM、BmBV-Sw106-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG、BmBV-Sw106-pF-A3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG和BmBV-Sw106-pF-A3-dgp64-IM后,家蚕幼虫在第5 d开始出现发病症状,第10 d发病率分别达到90%、80%、77.78%、70%和50%,比阳性对照组家蚕幼虫发病率分别降低了10%、20%、22.22%、30%和50%。注射10-3的重组病毒BmBV-Sw106-pF-A3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG、BmBV-Sw106-pF-A3-dgp64-IM-p U-A3-die0-IG、BmBV-Sw106-pF-A3-die1-dgp64-IM和BmBV-Sw106-pF-A3-dgp64-IM后,家蚕幼虫在第8 d开始出现死亡情况,第10 d亡率分别达到70%、66.67%、60%和50%,比阳性对照组家蚕幼虫死亡率分别降低了20%、22.23%、30%和40%。综上所述,本研究利用RNAi技术干扰ie1、gp64和ie0基因对BmNPV增殖复制起到了明显的抑制作用,结合转基因技术,为培育具有BmNPV抗性的转基因家蚕提供了理论基础。