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目的:通过运用失荅剌知丸及其拆方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠进行干预研究,探讨失荅剌知丸在脑缺血再灌注损伤治疗中的作用机制及其可能的有效配伍成分。方法:将204只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组(A组),假手术组(B组),模型组(C组),失荅剌知丸组(D组),巴豆组(E组),巴豆+三药组(F组),巴豆+余药组(G组),其中后5组制备局灶性脑缺血再灌注模型,并按取材时间点不同分为1d、3d、7d组。各组大鼠取材前应用Garcia JH法进行神经功能评分。应用HE染色法观察大鼠各时间点脑组织病理学形态改变;TUNEL法观察脑缺血再灌注后细胞凋亡的情况;免疫荧光法、RT-PCR法、Western Blot检测观察MAPK-ERK信号通路中ERK1/2、ERK5的蛋白表达水平。结果:1.神经功能评分结果(1)与空白对照组及假手术组相比,各组评分均减低(P<0.01);与模型组相比,各药物干预组评分均增加(P<0.05或P<0.01);(2)各药物组中,失荅剌知丸组神经功能评分高于各拆方组,各拆方组中以巴豆+三药组评分最高(P<0.05或P<0.01);(3)模型组及各药物组神经功能评分随时间延长而增加。2.Western-bolt结果(1)与空白对照组及假手术组相比,各组大鼠脑组织海马区p-ERK1/2及p-ERK5活化程度均升高(P<0.01);与模型组相比,各药物组中p-ERK1/2、p-ERK5活化程度均升高(P<0.05或P<0.01);(2)各药物组中失荅剌知丸组p-ERK1/2、p-ERK5活化程度均优于各拆方组,各拆方组中以巴豆+三药组p-ERK1/2、p-ERK5的活化程度最显著(P<0.05或P<0.01)(3)模型组及各药物组p-ERK1/2、p-ERK5活化程度随时间延长而升高。3.RT-PCR结果(1)与空白对照组及假手术组相比,各组大鼠脑组织海马区ERK1/2及ERK5的mRNA相对表达含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,各药物组ERK1/2、ERK5表达含量均升高(P<0.05或P<0.01)(2)各药物组中,失荅剌知丸组ERK1/2和ERK5的mRNA相对含量优于各拆方组,各拆方组中以巴豆+三药组中的ERK1/2和ERK5的mRNA相对含量最高(P<0.05)。(3)模型组及各药物组ERK1/2和ERK5的mRNA相对含量随时间延长而升高。4.大鼠脑组织海马区HE染色结果(1)模型组大鼠海马CA1区神经细胞较空白对照组及假手术组排列松散、紊乱、模糊,胞核与胞质界限欠清晰;与模型组相比,各药物组神经细胞形态改善明显;(2)各药物组中以失荅剌知丸组改善效果最明显;各拆方组中以巴豆+三药组神经细胞形态改善较为明显。5.大鼠脑组织海马区TUNEL结果(1)模型组较空白对照组和假手术组大鼠脑组织海马区凋亡细胞计数明显增加(P<0.01);与模型组相比,各药物组凋亡细胞计数均减少(P<0.05或P<0.01);(2)各药物组中失荅剌知丸组凋亡细胞计数低于各拆方组,各拆方组中以巴豆+三药组凋亡细胞计数最低(P<0.05);(3)模型组及各药物组凋亡细胞计数随时间延长而减少。6.大鼠脑组织海马区免疫荧光结果(1)模型组较空白对照组及假手术组大鼠脑组织海马区p-ERK1/2及p-ERK5的阳性细胞计数明显增加(P<0.01);与模型组相比,各药物组p-ERK1/2、p-ERK5阳性细胞计数升高(P<0.05或P<0.01);(3)各药物组中,失荅剌知丸组p-ERK1/2和p-ERK5的阳性细胞计数最多,各拆方组中以巴豆+三药组阳性细胞计数最多(P<0.05或P<0.01);(3)模型组及各药物组p-ERK1/2和p-ERK5的阳性细胞计数随时间延长而升高。结论:1.失荅剌知丸及各拆方组均可改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能损伤,抑制神经细胞凋亡,这可能与其参与调节MAPK-ERK通路中ERK1/2及ERK5的表达相关。2.各拆方组中以巴豆、柴胡、黑诃子、芦荟四味药物的组方治疗效果最佳,考虑该组药物可能是失荅剌知丸能有效抑制局灶性脑缺血再灌注损伤的主要药物组成;巴豆可能是四味药中发挥脑保护作用的主要药物之一。