【摘 要】
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实验目的:大量的研究证实分娩的发动与羊膜上皮细胞的衰老相关,而动物实验表明随着孕周的增加,肺泡表面活性物质不断累积,能够导致分娩的发生。因此本研究旨在探讨正常足月临产羊水中胎肺来源外泌体是否可以诱导羊膜发生衰老。实验设计:收集临产的羊膜标本,β-半乳糖苷酶染色证实其发生老化;超速离心方法分离出足月临产羊水外泌体（TL-exo）以及足月未临产羊水中的外泌体（TNIL-exo）,提取并培养人原代羊膜上
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实验目的:大量的研究证实分娩的发动与羊膜上皮细胞的衰老相关,而动物实验表明随着孕周的增加,肺泡表面活性物质不断累积,能够导致分娩的发生。因此本研究旨在探讨正常足月临产羊水中胎肺来源外泌体是否可以诱导羊膜发生衰老。实验设计:收集临产的羊膜标本,β-半乳糖苷酶染色证实其发生老化;超速离心方法分离出足月临产羊水外泌体（TL-exo）以及足月未临产羊水中的外泌体（TNIL-exo）,提取并培养人原代羊膜上皮细胞（hAECs）,TL-exo和TNIL-exo分别刺激hAECs,Western blot检测与衰老相关的P38 MAPK以及P53信号通路,衰老损伤细胞特征性表达的损伤相关分子模式（DAMPs）;β-半乳糖苷酶和流式细胞术检测细胞衰老和凋亡情况;酶联免疫吸附实验检测凋亡损伤细胞释放的衰老相关分泌表型（SASPs）。人肺泡腺癌基底上皮细胞（A549）可以分泌肺泡表面活性物质,因此常被视作肺泡Ⅱ型上皮细胞的替代细胞系,能够表达肺泡Ⅱ上皮细胞的特异性标志物EpCAM和SP-C。收集A549细胞培养上清液,通过超速离心分离出A549细胞来源的外泌体（A549-exo）,与hAECs共培养,同时设置一组空白对照,Western blot检测调控细胞衰老和凋亡相关的P38 MAPK和P53信号通路激活情况以及衰老损伤细胞特征性表达的DAMPs;β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术检测细胞衰老和凋亡情况;酶联免疫吸附实验检测凋亡损伤细胞释放的衰老相关分泌表型（SASPs）的浓度。最后,通过向妊娠小鼠的羊膜腔内注射A549-exo,对照组注射等量1xPBS缓冲液,观察两组小鼠发生阴道流血以及早产的概率。实验结果:与TNIL-exo相比,TL-exo可以激活调控细胞衰老凋亡相关的P38 MAPK以及P53信号通路,使羊膜上皮细胞发生老化,衰老的细胞能够释放更高水平的DAMPs和SASPs。同时,A549-exo刺激细胞后,激活了 P38 MAPK和P53信号通路,导致了细胞衰老和凋亡的比例较空白对照组升高,DAMPs和SASPs表达水平上升。最后,动物实验证实妊娠小鼠羊膜腔内注射A549-exo后,小鼠阴道流血和早产的发生率更高。实验结论:本实验间接证明了临产羊水中胎肺来源外泌体能够激活调控细胞衰老的信号通路P38 MAPK和P53,导致细胞衰老和凋亡的发生率升高,衰老损伤的羊膜上皮细胞能够释放特征性的DAMPs和SASPs;同时动物实验证实胎肺来源外泌体能够导致妊娠小鼠阴道流血和早产的发生率升高。综上所述,足月临产羊水中胎肺来源外泌体可以使得羊膜上皮细胞发生老化,从而导致分娩的发动,这一研究结论可能为探究人类分娩的发动机制提供了新的研究方向。
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