淫羊藿育苗与愈伤及不定根的组织培养

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淫羊藿(Epimedium Linn.)作为传统的药用植物,在我国已有2000多年的应用历史,现代科研人员在其体内发现总黄酮、多糖、生物碱等多种强生理活性的化学成分,目前在传统医学及现代医学中应用广泛。当前淫羊藿的市场需求量约为5000吨/年,主要的获取方式以采挖野生植株为主,对自然环境破坏很大,不利于产品开发和进一步的科学研究。为了满足市场需要,纯化药材品质,保护淫羊藿野生种质资源及其周边环境,本实验从种子休眠的解除、实生苗的培育和组织培养三个方面对淫羊藿的生物学特性进行研究,实验的研究方法、完成的主要工作及相关结论如下:1、种子休眠的解除通过正交实验筛选出能够有效解除淫羊藿种子休眠的最佳药剂组合,结果表明,钨酸钠1320mg/L+氟啶酮2.5mg/L+赤霉素300 mg/L+硝普钠298 mg/L+乙烯利144.5mg/L的组合对于促进种子解除休眠效果最好,经该组合处理过的种子60d内即可解除休眠,总发芽率达80%。显著性分析与极差R的结果表明,钨酸钠、氟啶酮、赤霉素、硝普钠,乙烯利对于淫羊藿种子总发芽率的影响均达到极显著(P<0.01),其影响力由大到小依次是:氟啶酮>钨酸钠>乙烯利>赤霉素>硝普钠。2、实生苗的培育通过正交实验对播种淫羊藿实生苗的苗床基质组合进行筛选,结果显示,播种于基质组合为草炭2份+蛭石3份+珍珠岩1份苗床上的种苗,其存活率是最高的,可达70.42%。显著性分析与极差R的结果表明,草炭对实生苗成活率的影响达到了显著水平(P<0.05),三因素间的影响力由大到小依次是:草炭>蛭石>珍珠岩。3、愈伤及不定根的组织培养(1)愈伤组织诱导:以淫羊藿叶梗为外植体设计正交实验,筛选出有利于愈伤组织诱导的最适激素和外源添加物组合2,4-D1.5mg/L+6-BA3.0mg/L+KT1.5mg/L+NAA0.5mg/L+椰子水70ml/L+酪蛋白0.5g/L,该组合处理下的外植体成愈率可达到77.40%。显著性分析与极差R的结果表明,KT的使用达到了显著水平(P<0.05),而2,4-D达到极显著(P<0.01),各因素间的影响力由大到小分别是:2,4-D>KT>酪蛋白>6-BA>NAA>椰子水。(2)不定根诱导:以淫羊藿愈伤组织为外植体设计正交实验,筛选有利于不定根诱导的最适激素组合,由实验结果可知,激素组合NAA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+6-BA0.3 mg/L+IAA0.6mg/L,对于诱导愈伤组织根系的形成效果最好,出根率可达到90.71%,结合显著性分析与极差R的结果可知,IAA的使用达到了极显著水平(P<0.01),几种激素间的影响力由大到小依次是:IAA>NAA>6-BA>IBA。(3)总黄酮合成诱导:以淫羊藿愈伤组织及不定根为实验材料设计正交实验,分别筛选出有利于愈伤组织和不定根体内总黄酮合成的最适诱导子组合。实验结果表明,水杨酸0.9mg/L+酵母提取物浓度1.0mg/m L+茉莉酸甲酯浓度5.0mg/L,最有利于愈伤组织内总黄酮的含量提升,含量可达5.73%;水杨酸0.7mg/L+酵母提取物浓度1.0mg/m L+茉莉酸甲酯浓度4.0mg/L,最有利于不定根内总黄酮的含量提升,含量可达5.76%。结合显著性分析与极差R的结果可知,水杨酸对于诱导愈伤组织和不定根合成总黄酮,水平均达到显著(P<0.05),其中对于促进愈伤组织内总黄酮的合成,几种诱导子间的影响力由大到小依次是:水杨酸>茉莉酸甲酯>酵母提取物,对于促进不定根内总黄酮的合成,其影响力由大到小依次是:水杨酸>酵母提取物>茉莉酸甲酯。
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