仿生纳米材料的制备及其抗动脉粥样硬化研究

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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)作为一种主要作用于人体血管的病症,是多方面综合影响的结果,它能够诱发冠心病以及外周动脉疾病等多种脑缺血性疾病。目前临床上治疗AS的方法主要是采用药物治疗和手术治疗,但传统口服抗炎药物的生物利用度低、靶点特异性差、毒性高,而手术干预(如支架置入术)往往伴随着再狭窄、晚期支架血栓形成等副作用,大大降低了治疗效果。纳米药物递送系统由于其具有能够改善药物分布、提高药物的吸收速率、延长药物的半衰期、以及降低药物的毒性和副作用等优良特性而得到广泛应用。然而,传统的纳米技术递送系统常被生物体当作异物清除,导致药物难以到达病灶部位。为了使AS能够得到安全且高效的疗效,本实验过程中所涉及到的细胞膜的提取均使用细胞膜/细胞浆蛋白提取试剂盒,并将其包被在人工合成的碳纳米粒子表面,制备了具有靶向性和安全性的仿生纳米材料MMCNPs。研究表明MMCNPs具备典型的纳米特性,能够长效促进血液循环、灵敏识别AS病变组织。本论文的研究工作主要从以下三个方面展开:(1)通过水热合成法制备了碳纳米粒子(CNPs),对CNPs进行粒径和电位分析、电镜(TEM,SEM)检测、红外、XPS分析以及自由基清除实验,结果表明制备的CNPs具有纳米级别、分散性良好、粒径均一且具有一定的抗氧化能力。之后将巨噬细胞膜与纳米粒子混合均匀,使用脂质体挤出器制备得到仿生纳米材料(MMCNPs),并对其进行了粒径和Zeta电位分析、透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)检测、共定位、以及蛋白表征的研究,结果表明细胞膜与纳米粒子通过脂质体挤出器制备得到了具有粒径均一、分散性较好的纳米材料MMCNPs,而且具有典型的“核-壳”原位膜结构,此外原始巨噬细胞膜上的蛋白及特异性功能蛋白也没有遭到破坏,能够被MMCNPs较好地保留下来。(2)对制备的仿生纳米材料MMCNPs开展了一系列细胞层面的功效性验证研究。在体外巨噬细胞吞噬纳米材料的实验中,纳米粒子进入巨噬细胞内的量与时间呈正相关,且巨噬细胞对CNPs的摄取量明显高于MMCNPs的摄取量。该结果意味着被细胞膜包被的碳纳米材料能够避免被机体作为异物排出体外,并能够遏制巨噬细胞对其的摄取。在体外炎症内皮细胞摄取纳米材料的实验中,发现刺激后的内皮细胞能够明显的提高对CNPs及MMCNPs的摄取,但对MMCNPs的摄取量明显高于CNPs,这意味着碳纳米材料被膜包被后能更多的进入到炎症内皮细胞。(3)通过体内动物实验研究了MMCNPs治疗AS的疗效。将RCNPs及MMRCNPs注射到高脂饲养的Apo E-/-小鼠模型中,24小时后解刨进行小动物荧光成像,发现与单独的RCNPs相比,MMRCNPs在AS的聚集量增加了将近2倍,且在肝脏和肾脏的蓄积量比RCNPs组的蓄积量少。这个结果表明,碳纳米材料被膜包覆后能够增加纳米粒子在AS的聚集量,且具有良好的靶向AS病变部位的能力。
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