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目的：构建同时表达VEGF-A和VEGF-C的短发夹RNA真核表达载体，并通过其介导的RNA干扰作用，研究对人神经母细胞瘤细胞株IGR-N-91细胞中VEGF-A和VEGF-C的mRNA及其蛋白的表达，以及对细胞生长及凋亡的作用及机制。
方法：分别根据VEGF-A和VEGF-C的cDNA序列合成八对寡核苷酸片段，退火后分别插入真核表达载体组成重组质粒。对重组质粒进行PCR、测序鉴定验证后并经Western Blot筛选，然后分别将筛选所得的RNA干扰效果最佳的质粒转染人神经母细胞瘤细胞株IGR-N-91。转染48h后提取总RNA，经RT-PCR半定量检测VEGF-A和VEGF-C mRNA的表达水平，Annexin V和PI双重标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况；PI标记后经流式细胞仪检测对IGR-N-91细胞株细胞周期的影响；ELISA分别检测VEGF-A和VEGF-C蛋白的表达水平；MTT法检测VEGF-A和VEGF-C表达下降后细胞增殖的情况。
采用分子克隆的方法，将分别得到验证的VEGF-A和VEGF-C RNA干扰片段切下，构建到同一个真核表达载体中，得到一个能够同时下调VEGF-A和VEGF-C表达的RNA干扰真核表达载体重组质粒。将重组质粒体外转染细胞株IGR-N-91以验证其效果。
结果：成功构建含有VEGF-A和VEGF-C的RNA干扰片段真核表达载体，经Western Blot筛选后分别得到RNA干扰效果最佳的片段。
采用分子克隆的方法，成功将效果最佳的RNA干扰片段插入到同一个重组质粒中并经PCR和测序验证；RT-PCR结果表明质粒转染人神经母细胞瘤后VEGF-A和VEGF-C mRNA受到显著抑制（p<0.05）；流式细胞仪检测结果显示转染的外源基因未引起显著的神经母细胞瘤细胞凋亡；ELISA检测VEGF-A和VEGF-C蛋白的表达水平受到显著抑制；MTT结果表明肿瘤细胞的增殖受到显著抑制；细胞周期发生显著性改变。
结论：成功构建同时含有人VEGF-A和VEGF-C RNA干扰片断的真核表达载体，将此重组质粒转染人神经母细胞瘤IGR-N-91细胞后能显著抑制VEGF-A和VEGF-C mRNA和蛋白的表达，能够显著抑制肿瘤细胞的增殖。