【摘 要】
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香蕉枯萎病发病率与土壤中香蕉枯萎病菌FOC4的数量密切相关。为了在香蕉定植前准确检测土壤中FOC4的数量,本研究以本实验室克隆的FOC4特异性基因片段作为标准线性片段,设计了
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香蕉枯萎病发病率与土壤中香蕉枯萎病菌FOC4的数量密切相关。为了在香蕉定植前准确检测土壤中FOC4的数量,本研究以本实验室克隆的FOC4特异性基因片段作为标准线性片段,设计了特异性荧光定量引物。在此基础上,以标准线性片段为模板建立荧光定量标准曲线,以无FOC4的土壤配置FOC4孢子浓度梯度标准土样,采用Mo Bio 土壤基因组DNA提取试剂盒提取总DNA,以各FOC4孢子浓度梯度(1.66×103~1.66×108 copies/μL)的标准土样所提取的总DNA为模板进行实时荧光定量PCR,测定各标准土样中FOC4数量。以标准土样FOC4线性片段基因拷贝数的结果与FOC4线性片段基因100%提取率时的理论拷贝数的比值作为该标准土样FOC4基因组的提取率,对待检测土样FOC4的定量检测值进行校正,建立了一套较准确检测土壤FOC4数量的实时荧光定量PCR技术,其检测下限可达300个孢子/克土。应用该技术对香蕉枯萎病发病土与香蕉枯萎病未发病土土壤样本进行检测,检测结果差异显著。对香蕉枯萎病发病率低于1%、1%~5%、5%~20%、20%以上土壤样本FOC4荧光定量检测差异显著。香蕉枯萎病发病率随土壤中FOC4数量增加而提高,土壤中FOC4数量在7×103以下时,香蕉枯萎病发病率低于1%;土壤中FOC4数量在2×104以上时,香蕉枯萎病发病率严重。对香蕉枯萎病发病率严重(50%以上)香蕉园进行检测,用棉隆、石灰分别处理土壤14天后,能显著降低土壤中的FOC4数量,但不足以降低到低发病率(1%以下或1%~5%)数量以下。对香蕉枯萎病发病率(1%-5%)香蕉园进行检测,综合防控3个月后,棉隆、石灰处理后施用复合微生物肥和木霉生物有机肥能有效控制土壤中FOC4数量;棉隆、石灰处理后施普通化肥可使土壤中FOC4数量提高。本研究可为准确检测土壤中的FOC4含量以及香蕉枯萎病的防控措施的制定提供帮助。
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