拮抗尖孢镰刀菌的生物活性物质筛选与鉴定

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植物枯萎病是一种常见的农业病害,会严重影响农业生产,而枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌,其作为一种土传病害真菌,在农业上的防治较为困难。为了得到对尖孢镰刀菌具有抑制作用的生物活性物质,开发新型生物农药,本文通过平板对峙法筛选得到了1株尖孢镰刀菌香蕉专化型、4株微藻、4株拮抗细菌和1株拮抗真菌。并对筛选得到的藻种和菌种进行了分子生物学鉴定确定了其种属,并构建了微藻与细菌各自的系统发育树,确定了拮抗微藻主要是小球藻、杜氏盐藻和绿球藻,四株细菌分别为弗氏柠檬酸杆菌、屎肠球菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,拮抗真菌为深绿木霉。在对上述拮抗微生物的有效成分进行提取后,使用平板抑制法,比较了各提取物对尖孢镰刀菌的抑制率,发现小球藻T5-2的乙酸乙酯提取物在72 h后对尖孢镰刀菌的抑制率高达61.54%;同时发现浓度为5 mg/ml的地衣芽孢杆菌ZF-4的胞内提取物对于尖孢镰刀菌72 h后的抑制效果仍有52.94%;而相同浓度的深绿木霉M8的发酵液粗提物对尖孢镰刀菌的抑制率只为43.84%,此外该提取物对其他四株农业病害菌也有较强的抑制效果,其中对三线镰刀菌的抑制率甚至高达88.00%。在对各有效成分进行分析时发现,T5-2的提取物具有较强的氧自由基清除能力,其总酚含量甚至高达63.66μg/ml,这可能是其具有较强抑菌活性的原因之一;而经过高温和蛋白酶处理的ZF-4的胞内提取物的抑菌效果大幅降低,表明其抑菌有效成分可能为蛋白或多肽类物质;将M8细胞发酵液粗提物纯化后,使用GC/MS对其中的组分进行了分析,经鉴定发现其抑菌有效物质为5-羟基2-羟甲基-4-吡喃酮。在上述研究的基础上,以患病的葡萄植株作为研究对象,通过喷施ZF-4活菌剂进行了田间试验,有效防治了葡萄枯萎病,同时降低了葡萄的裂果率,增大了葡萄粒径,为后续ZF-4的大规模田间施用进行了探索。
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