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华北大黄(Rheum franzenbachii Munt.)为蓼科大黄属(RheumLinn.)植物,其根及根茎入药,味苦,性寒,有泻热、通便、破积、行瘀的功能,用于治疗热结便秘、湿热黄疸、痈肿疔毒、烫火伤等。此外,有抗菌、消炎、收敛、止血等作用。
土大黄苷(rhaponticin)是华北大黄中的一种活性物质,近年来研究发现土大黄苷具有降血糖、抗氧化等多种药理活性。本研究以野生华北大黄为材料,探讨了不同种类、不同浓度的植物生长调节剂对华北大黄的愈伤组织诱导效应及增殖效应,并借助高效液相色谱对其有效成分-土大黄苷含量进行了测定,为华北大黄的进一步开发利用奠定了基础。主要研究结果如下:
1.以野生华北大黄叶片为外植体,用6-BA2.0mg/L与NAA(0.1、0.5、1.0mg/L)组合诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率在16.7%~58.3%之间,其中愈伤组织诱导的最佳组合为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L。
2.培养基中单独添加TDZ、KT、6-BA、NAA、2,4-D均不适于愈伤组织的增殖。不同浓度的6-BA(0.5、1.0、2.0、4.0mg/L)和NAA(0.5、1.0、2.0mg/L)组合有利于愈伤组织增殖,其中6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L是最佳的鲜重和干重增殖配方,鲜重量达10.11g/瓶,增殖19倍;愈伤组织干重达0.64g/瓶,增殖15倍。该培养基作为继代培养基。
3.0.5、1.0、2.0、4.0mg/L的TDZ、6-BA分别与0.2mg/L的2,4-D、NAA、IAA组合,TDZ0.5mg/L+NAA0.2mg/L是增殖的最佳培养基,鲜重量达13.15g/瓶,增殖25倍;干重量达0.60g/瓶,增殖14倍。
4.愈伤组织分别接种于含TDZ0.5mg/L+NAA0.2mg/L和6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L的MS培养基中,生长周期为39d,干重和鲜重生长曲线均为“S”型,并明显地分为三个时期:延迟生长期(0~12d)、指数生长期(鲜重为12~33d、干重为12~30d)和静止期(鲜重为33~39d、干重为30~39d)。
5.经纸层析法鉴定,野生植株和愈伤组织中均含有土大黄苷;用HPLC测定了土大黄苷含量,选取的6种愈伤组织中有四种(培养基类型分别为TDZ0.5mg/L+NAA0.2 mg/L、6-BA1.0 mg/L+NAA0.2mg/L、TDZ2.0 mg/L+2,4-D0.2 mg/L、6-BA4.0 mg/L+2,4.D0.2 mg/L)土大黄苷的含量高于野生植株(4.0mg/g),其中最高者(培养基类型为TDZ0.5mg/L+NAA0.2 mg/L)土大黄苷的含量(16.6mg/g)为野生植株的4倍之多。