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人涎腺粘液表皮样癌(Mucoepidermoid Caecinoma,MEC)是涎腺最常见的恶性肿瘤,约占涎腺恶性肿瘤的30%。低分化的涎腺粘液表皮样癌侵袭和转移能力强,5年的存活率不超过43%。肿瘤的多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因之一。多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药产生耐药性后,对结构与作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药的现象。这种现象可以是先天的,也可以是后天诱导产生的。导致肿瘤产生MDR现象的原因很多,如使肿瘤细胞内化疗药物浓度降低,谷胱甘肽依赖性解毒酶系统活性增加,细胞内DNA损伤耐受性或修复机制增加,DNA拓扑异构酶量或活性的降低,癌基因激活异常表达等。目前认为其共同的生物学基础是MDR-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)过量表达,与肿瘤内药物结合或直接从细胞膜上排除抗肿瘤药物,从而降低药物对肿瘤细胞的毒性所致。本研究中,我们建立了人粘液表皮样癌耐药细胞系Mc3/5-FU,并检测了Mc3/5-FU细胞的生物学特性,检测Mc3细胞和Mc3/5-FU细胞中MDR-1基因表达差异。构建MDR-1-ShRNA载体,稳定转染Mc3/5-FU细胞,阻断其MDR-1表达。主要研究方法和结果包括以下几个方面:1人涎腺粘液表皮样癌耐药细胞系Mc3/5-FU的建立及其生物学特性针对高转移人涎腺粘液表皮样癌细胞系Mc3采用裸鼠体内成瘤加药诱导然后在体外用恒定浓度间歇法持续加药,经过共6个月的体内、体外诱导,细胞在含有1mg·L -1的5-FU中生长增殖稳定,基本保持4d传代一次,诱导后的细胞命名为Mc3/5-FU细胞系。应用显微镜和电镜观察法、细胞计数法、MTT法,RT-PCR、免疫荧光等方法观察了细胞形态和超微结构,检测了细胞的耐药性,多药耐药基因MDR-1及其产物P-gp蛋白的表达。结果显示,Mc3细胞和Mc3/5-FU细胞形态及超微结构差异不显著,细胞群体倍增时间分别为60h和55h。Mc3/5-FU细胞对5-FU、BLM、VCR、VBL、CDDP的耐药指数分别为13.3、4.2、6.4、6.9和0.72。Mc3/5-FU细胞稳定表达MDR-1基因和P-gp蛋白, Mc3则不表达MDR-1基因和P-gp蛋白。MRP-1基因和MRP蛋白在Mc3/5-FU中表达较强,在Mc3细胞中表达较弱。2 MDR-1-ShRNA载体构建真核表达载体稳定转染细胞株的建立按照siRNA设计原则,设计针对MDR-1基因的shRNA,构建pRNAT-U-6.1-MDR-1真核表达载体。应用Lipofectamine 2000转染Mc3/5-FU细胞,600μg/ml G418筛选3周。用RT-PCR证实稳定转染MDR-1-shRNA后MDR-1,mRNA的表达水平被显著抑制。结论:1. Mc3/5-FU具有多药耐药性。2. MDR-1基因和P-gp蛋白以及MRP-1基因和MRP蛋白在Mc3/5-FU中高表达。MRP-1基因和MRP蛋白在Mc3/5-FU中表达较强,在Mc3细胞中表达较弱。3.体内,体外联合诱导是建立耐药细胞系的一种有效方法。4. MDR-1-shRNA能有效抑制Mc3/5-FU中MDR-1表达。