【摘 要】
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目的:观察不同浓度(0、0.1、1、5、10 ng/ml)的表皮生长因子(EGF)对卵母细胞的体外成熟率、受精率及胚胎体外发育率的影响,从而确定表皮生长因子的最佳作用浓度;观察5ng/ml表皮
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目的:观察不同浓度(0、0.1、1、5、10 ng/ml)的表皮生长因子(EGF)对卵母细胞的体外成熟率、受精率及胚胎体外发育率的影响,从而确定表皮生长因子的最佳作用浓度;观察5ng/ml表皮生长因子对卵丘卵母细胞复合体(COCs)的卵丘扩展率的影响并检测相关基因HAS2水平的变化。
方法:取未成熟的卵母细胞,分成五组,分别放入含有不同浓度(0、0.1、1、5、10 ng/ml)表皮生长因子的成熟液M199中培养,观察卵母细胞的成熟情况及受精后胚胎的发育情况。将未成熟的卵丘卵母细胞复合体分成两组培养(不含EGF、含5ng/mlEGF组),15h观察卵丘扩展率,并进行RT-PCR检测以确定EGF对HAS2基因表达的作用。
结果:EGF能提高卵母细胞的成熟率及二细胞发育率,随着EGF浓度的提高,两者先升后降。5ng/ml组与对照组相比二者差异及显著,并且显著高于其他组。这说明在成熟液中添加5ng/mlEGF在提高卵母细胞的成熟率及二细胞发育率方面效果最好。在胚胎培养液中添加EGF对卵裂率和囊胚发育率无影响,而在1ng/ml组和5ng/ml组,突破二细胞的比率显著高于对照组,并且5ng/ml组的二细胞突破率高于其它各组。同时可以看出1、5、10ng/ml组的囊胚孵化率也显著高于对照组。加有5ng/ml EGF组的卵丘II、III度扩展率明显高于对照组,差别有统计学意义。用软件分析RT-PCR结果显示成熟培养液中加有表皮生长因子组比对照组的HAS2基因的表达水平高。
结论:表皮生长因子可以提高小鼠未成熟卵母细胞的体外成熟率及其受精后的二细胞发育率,有助于胚胎突破二细胞的阻滞,同时也有利于囊胚的孵化。5ng/ml EGF组的效果最好。5ng/ml的EGF也可以促进卵丘卵母细胞复合体的卵丘扩展,与EGF可以提高卵丘卵母细胞复合体的HAS2基因表达水平有关。
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