研究背景：医院内感染伴随着医院的出现而产生的,医院感染常见的细菌有大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等,伴随着抗生素的大量应用,细菌出现了多重耐药。在医院感染菌的检测中产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌占大肠埃希氏菌的74%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌占金黄色葡萄球菌的76%,产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌是医院常见的耐药菌株,真菌感染检出率呈现逐年上升的趋势,真菌以白色念珠菌为代表。消毒剂与抗生素同属于具有特殊抑杀微生物作用的化学物质,它们对微生物的作用机制也有很多相同或相似之处。这类菌株亦可对消毒剂产生抗性,是医院感染的重要病原菌。有效杀灭医院感染菌,控制医院感染,是目前各个医院面临的重要课题。本文系统地研究医院5种常用消毒剂对医院感染菌以及消毒对照菌的杀灭作用,在使用范围内的杀菌作用,以及医院感染菌对这5种消毒剂使用浓度是否有抗性作用。指导医院合理适量地应用消毒剂,杀灭院内感染菌,减少院内感染,同时减少消毒剂对环境的污染。这种系统的研究目前国内外报道比较少见。研究目的：比较医院常用的5种消毒液对医院感染菌产超广谱β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌、产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌以及对消毒对照菌中铜绿假单胞菌(ATCC15442)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231)的杀菌效果、现场试验结果和影响因素试验,研究这5种消毒剂的杀菌效果、杀菌剂量,以及医院感染菌对消毒剂的抗性。研究方法：1菌种：1.1临床分离的医院感染菌：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、产超广谱β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌、产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌。1.2消毒对照标准菌株：铜绿假单胞菌(ATCC15442)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231)2使用剂量的消毒剂：2%戊二醛(中性强化)、200mg／L健之素、0.2%安尔碘、75%酒精、0.1%新洁尔灭3中和剂选择试验：细菌以金黄色葡萄球菌(ATCC6538)标准株为试验菌,5种使用剂量的消毒剂每种试验设计6组,按照2002版《消毒技术规范》规定的指标执行,选择出符合要求的中和剂。真菌以白色念珠菌标准株为试验菌,按上述方法选择出符合要求的中和剂。4悬液定量杀菌试验：将不同消毒剂用标准硬水稀释成一系列试验浓度,将消毒剂和菌悬液混匀作用不同的时间后,分别取药菌混合液加入装有含相应中和剂的营养肉汤管中,混匀,培养观察结果。同时做好阴阳性对照。5现场消毒试验5.1物体表面模拟现场消毒试验200mg／L健之素、75%酒精两种消毒液做物体表面模拟现场消毒试验。按照2002版《消毒技术规范》规定的步骤进行试验,计算杀灭率。5.2 2%戊二醛对医疗器械的消毒模拟现场试验采用医用止血钳的轴齿至轴端部分做样本,以载体浸泡定量杀菌试验进行消毒效果测定。计算浸泡l0min杀灭率。5.3安尔碘皮肤现场消毒试验在受试志愿者左前臂内侧5cm×5cm皮肤上,用无菌棉拭沾取采样液涂抹采样,做阳性对照,然后用棉拭沾取0.2%安尔碘按一定方向对右前臂内侧5cm×5cm皮肤均匀涂抹一遍,滞留1min,用无菌棉拭沾取中和剂做消毒后采样,做活菌计数培养,计算杀灭率。5.4 0.2%安尔碘皮肤消毒模拟现场试验随机选定身体健康、皮肤健康的受试者18人次。按照2002版《消毒技术规范》规定的步骤进行试验,计算杀灭对数值。5.5 0.1%新洁尔灭对手消毒模拟现场试验选择14名志愿者,随机分为两组,第一组使用参考样品,第二组使用试验样品。按照2002版《消毒技术规范》规定的步骤进行试验。6有机物的影响试验在试验菌悬液内加入不同浓度小牛血清代表有机物,按悬液定量杀菌试验程序,观察有机物对消毒液杀菌效果的影响。研究结果：1中和剂鉴定试验结果1.1细菌繁殖体以金黄色葡萄球菌(ATCC6538)标准株为代表菌株,在试验温度20±1℃的条件下,细菌繁殖体的中和剂鉴定试验结果如下：2%戊二醛的中和剂为：0.2%甘氨酸、2%吐温-80、0.07%卵磷脂。200mg／L健之素消毒液的中和剂为：0.5%硫代硫酸钠、2%吐温-80、0.07%卵磷脂。0.2%安尔碘的中和剂为：0.5%硫代硫酸钠、2%吐温-80、0.07%卵磷脂。0.1%新洁尔灭的中和剂为：0.3%卵磷脂、2%吐温-80磷酸盐缓冲液。75%酒精用稀释液1：10稀释消除杀菌作用。1.2真菌的中和剂鉴定试验结果,以白色念珠菌进行试验,在试验温度20±1℃的条件下,由试验得知,5种消毒剂真菌的中和剂与细菌繁殖体的中和剂一致。2悬液定量杀菌试验结果5种使用剂量的消毒剂分别对来自毓璜顶医院的医院感染菌以及消毒对照标准菌株7株菌作用1min、3 min、5min。平板上无菌落生长,杀灭率均为100%。显示医院感染菌对这5种使用浓度的消毒剂无抗性。3现场消毒试验结果3.1物体表面模拟现场消毒试验结果：用200mg／L的健之素、75%酒精擦拭被以上7种菌污染的台面,5min后采样,培养后均无菌生长,达到消毒要求。3.2 2%戊二醛对医疗器械的消毒模拟现场试验：分别用以上7株菌污染医用止血钳,在2%戊二醛消毒液中浸泡10min后,取样液培养,平板上均无菌生长。医院感染菌和标准菌用2%戊二醛浸泡10min均能达到消毒要求。3.3 0.2%安尔碘皮肤现场消毒试验：经检测,用0.2%的安尔碘消毒前臂皮肤并作用2min,对皮肤上的自然除菌率为100%,消毒前皮肤上的自然菌的平均数为232cfu／cm2,消毒后均无菌生长。3.4 0.2%安尔碘皮肤消毒模拟现场试验：分别用以上7株菌污染皮肤,消毒1min,消毒效果符合要求。3.5 0.1%新洁尔灭对手消毒模拟现场试验：分别用以上7株菌污染手,消毒5min消毒效果符合要求。4有机物的影响试验：25%、50%的小牛血清对2%戊二醛、200mg／L健之素消毒液、0.2%安尔碘的杀菌效果无影响；对75%的酒精、0.1%的新洁尔灭杀菌效果有显著的影响。结论：这5种消毒剂按照说明书的使用剂量和使用范围对医院感染菌进行消毒,能达到很好的消毒效果。这3种医院感染菌对医院常用消毒剂无抗性。