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目的:探讨补肺益肾组分方（Effective-component compatibility of Bufei Yishen formula,ECC-BYF）及其组分配伍对香烟烟雾提取物（Cigarette smoke extract,CSE）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）炎症反应的保护作用,并从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨其作用机制。方法:在CSE刺激BEAS-2B细胞构建的体外炎症模型中,将细胞随机分为空白对照组（Control）、模型组（10%CSE,Model）、补肺益肾组分方组（ECC-BYF）、补气组（BQ）、补肾组（BS）、补气补肾组（BB）、地塞米松组（200μg/m L,DEX）;MTT法检测不同浓度CSE、人参皂苷Rh1和淫羊藿苷对BEAS-2B细胞活力的影响;ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平;荧光探针DCFH-DA法测定细胞内ROS水平;可见光广度法测定SOD水平;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、PTEN、PI3K、Akt、NF-κB P65 m RNA的水平;Western Blot检测蛋白PTEN、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-IκBα、IκBα、p-NF-κB P65、NF-κB P65表达情况;使用CRISPR/Cas9技术,建立PTEN基因敲除的人支气管上皮细胞系（PTEN-/-BEAS-2B）,将细胞随机分为野生细胞（WT）+Control组、WT+Model组、WT+BB组及PTEN-/-+Control组、PTEN-/-+Model组、PTEN-/-+BB组;采用Western Blot检测蛋白p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-IκBα、IκBα、p-NF-κB P65、NF-κB P65表达水平及细胞免疫荧光检测NF-κB P65的核易位情况。结果:1香烟烟雾提取物、淫羊藿苷、人参皂苷Rh1对BEAS-2B细胞活力的影响MTT结果显示:0~5%CSE作用24 h对BEAS-2B细胞活力无明显抑制作用,10%~25%CSE可表现出细胞毒性;0~50μg/m L的人参皂苷Rh1对细胞活力无明显的影响,100~400μg/m L的人参皂苷Rh1可明显促进细胞增殖;0~100μg/m L的淫羊藿苷作用24 h对BEAS-2B细胞活力无明显抑制作用,150~250μg/m L的淫羊藿苷表现出明显细胞毒性。2补肺益肾组分方及其不同活性组分配伍对CSE刺激下BEAS-2B细胞ROS、SOD水平的影响与Control组相比,Model组细胞中ROS水平显著升高（P＜0.01）;与Model组相比,各用药组均可显著降低细胞内ROS水平（P＜0.01）,且BB降低ROS的水平优于ECC-BYF、BQ、BS（P＜0.01）;与Control组相比,Model组细胞中SOD水平显著降低（P＜0.01）;与Model组相比,各用药组均可显著升高细胞内SOD水平（P＜0.01）。3补肺益肾组分方及其不同活性组分配伍对CSE刺激下BEAS-2B细胞炎症因子水平的影响ELISA结果显示:与Control组相比,Model组炎症介质IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的分泌量显著增加（P＜0.01）;与Model组比,各用药组均可下调上述炎症介质的分泌量（P＜0.01）,其中BB作用效果优于ECC-BYF、BQ、BS（P＜0.01）。q RT-PCR结果显示:与Control组相比,Model组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αm RNA水平均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;与Model组比,各用药组均可下调上述炎症介质的m RNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01）。且BB下调IL-1βm RNA水平优于BQ和BS（P＜0.01）;下调IL-8 m RNA水平优于ECC-BYF和BQ（P＜0.05,P＜0.01）。4补肺益肾组分方及其不同活性组分配伍对CSE刺激下BEAS-2B细胞中PI3K/Akt/NF-κB信号转导通路的影响qRT-PCR结果显示:与Control组相比,Model组PI3K、Akt、NF-κB P65 mRNA水平均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,PTEN m RNA水平显著降低（P＜0.01）;与Model组比,各用药组均可下调PI3K、Akt、NF-κB P65 m RNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01）,上调PTEN m RNA表达水平（P＜0.01）,其中BB作用效果优于其他用药组（P＜0.05,P＜0.01）。Western Blot结果显示:与Control组比,Model组PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65的磷酸化水平显著升高（P＜0.01）,PTEN的表达量显著降低（P＜0.01）,PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65的蛋白表达水平无变化;与Model组比,各用药组均可显著下调PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65的磷酸化水平（P＜0.01）,上调PTEN的表达量（P＜0.01）,但对PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65表达水平无显著影响。其中,BB作用效果最佳（P＜0.05,P＜0.01）。5成功建立PTEN敲除BEAS-2B细胞系Western Blot结果显示:1#号PTEN敲除单克隆细胞无PTEN蛋白表达;Sanger测序及基因序列比对结果显示:TACAGGAA核苷酸序列被删除,PTEN敲除细胞系构建成功。6补气补肾活性组分配伍通过靶向PTEN进而影响PI3K/Akt/NF-κB信号通路Western Blot结果显示:与WT相比,PTEN-/-中PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65磷酸化水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;在WT中,与Control组比,Model组PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65磷酸化水平显著升高（P＜0.01）;与Model组相比,BB可显著下调PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65磷酸化水平（P＜0.01）;在PTEN-/-中,与Control组比,Model组PI3K、Akt、IκBα及NF-κB P65磷酸化水平显著升高（P＜0.01）,与Model组相比,BB对上述通路蛋白的影响无明显差异。细胞免疫荧光结果显示:在WT BEAS-2B细胞中,与Control组比,Model组NF-κB P65易位至细胞核中较多;与Model组相比,BB可减少NF-κB P65易位至细胞核中;PTEN-/-敲除细胞中,与Model组相比,BB组NF-κB P65易位至细胞核中无明显差异。结论:1补肺益肾方及其不同活性组分配伍通过下调IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α炎症介质对CSE诱导的体外炎症模型起到一定保护作用,其中补气补肾活性组分配伍抗炎效果最佳。2补肺益肾组分方及其不同活性组分配伍的抗炎作用可能与靶向PTEN调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。