中国中西部三省鼠传巴尔通体多样性研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:xrong19730911
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目的:通过本研究掌握中国宁夏、内蒙古和山西省部分区域鼠形动物巴尔通体的感染情况、宿主构成、遗传进化特征,为巴尔通体疾病防控提供科学依据。方法:本次研究选取的调查地区平均海拔为800~2400 m,年平均气温为0.7~19℃,东经105°~116°,北纬35°~45°,涉及3个省份8个地区的17个采样点。采用夹夜法捕鼠,用DNA分子条形码鉴定鼠种,记录性别,经纬度,海拔高度,栖息环境等信息,无菌操作取肝脏组织接种于含5%脱纤维羊血的TSA上培养,对疑似菌落做形态学鉴定,革兰氏染色镜检。粗提取菌落DNA,采用巴尔通体特异性引物扩增gltA基因,电泳分析后将产物测序并比对序列同源性。按照核酸提取试剂盒步骤提取阳性菌株DNA,进一步扩增fts Z、rpoB和16S rRNA基因并测序,Neighbor—Joining(NJ)建树分析。计算菌株核苷酸与单倍型多样性。持续传代培养并冷冻保存菌株。数据处理采用率进行统计描述,不同组间感染率的对比用χ2检验,统计分析运用SPSS19.0软件完成;经测序所得到的核酸序列,用Chromas软件来比对峰图,所测序列经NCBI BLAST进行同源比较和MEGA6.06构建Neighbor—Joining(NJ)树分析;运用ArcGIS软件构建采样地区鼠类捕获点和巴尔通体菌株基因型的分布;菌株的核苷酸与单倍型多样性由DnaSPv5软件计算。结果:1.巴尔通体感染情况检测本次研究在2013~2015三年间共采集宁夏、内蒙古和山西省部分地区鼠形动物标本787份,捕获13个鼠属26个鼠种,从12个鼠属21个鼠种中分离到219株巴尔通体,总体感染率为27.83%;其中内蒙古感染率最高为41.50%(107/256)、宁夏感染率为21.98%(51/232)、山西省感染率为20.40%(61/299)。涉及的鼠种有阿拉善黄鼠、达乌尔黄鼠、赤颊黄鼠、黑线姬鼠、朝鲜姬鼠、大林姬鼠、中华姬鼠、长尾仓鼠、短尾仓鼠、黑线仓鼠、大仓鼠、小家鼠、三趾跳鼠、五趾跳鼠、北社鼠、子午沙鼠、长爪沙鼠、洮州绒鼠、岢岚绒鼠、布氏田鼠和黑线毛足鼠。各个省份不同地区巴尔通体的感染率差异具有统计学意义(P<0.01);在不同海拔、年均气温、栖息环境、鼠种之间巴尔通体的感染率差异均具有统计学意义(P<0.01)。2.遗传进化分析将序列比对分析,得出所分离到的菌株主要分六个已知基因型:格拉汉姆巴尔通体(Bartonella grahamii)、伊丽莎白巴尔通体(B.elizabethae)、非洲跳鼠巴尔通体(B.jaculi)、日本巴尔通体(B.japonica)、泰勒巴尔通体(B.taylorii)和B.washoensis,以及1个未知种。阳性菌株对glt A基因,16S rRNA基因,ftsZ基因和rpoB基因进行扩增测序及比对串联分析,宁夏、内蒙古和山西省鼠形动物感染的巴尔通体核苷酸序列存在较大差别。序列多态性位点很多,单倍型和核酸多样性很高,经中性检验得出巴尔通体的进化方式为负向选择。结论:本次研究从三个省份分离出219株巴尔通体,其中包含6个已知基因型和1个新基因型,至少存在4种对人致病的基因型。结果阐明了鼠形动物巴尔通体的感染率受到栖息环境等多种因素的影响,巴尔通体菌群体的进化方式为负向选择。
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