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本文探讨了不同进化阶段水稻种质的耐储藏机制和脂肪氧化酶同工酶Lox1、Lox2缺失延缓稻谷陈化变质的机理。以脂肪氧化酶同工酶定量检测专利技术为平台,分析了低脂肪氧化酶Lox1、Lox2性状的遗传规律,并对Lox1、Lox2基因进行了初步定位,最后对RNAi转Loxs基因种子进行了耐储性评价。主要结果如下:
1、对68份不同进化阶段的水稻种质耐储藏特性的分析表明:籼粳形态指数和老化指数间呈显著正相关(r=0.238*),即籼粳形态指数越大,老化指数越大,越不耐储藏。在籼粳形态指数六个鉴定性状中,老化指数与酚反应显著正相关(r=0.232*)。不同水稻品种的抗氧化能力、GSH和花色苷含量、SOD、CAT、POD存在着显著的基因型差异,与储藏特性相关系数较大的是DPPH自由基清除率和POD活性。水稻种子的抗氧化作用与其种皮中花色苷含量极显著正相关(r=0.641**)。
2、对脂肪氧化酶缺失种质进行储藏后细胞学及生化成分分析,在考查种子生活力的基础上,用膜透性染料伊文思蓝对种子胚细胞进行染色,结果表明:Lox1,2缺失的1297细胞膜完整性较好,其电导率、丙二醛增加较少,证实了Lox1,2缺失有利于减轻膜脂过氧化作用和保持细胞膜系统的完整,从而延长了种子的寿命。
3、用低脂肪氧化酶Lox1、Lox2的1297分别与高脂肪氧化酶Lox1、Lox2的9311、日本晴杂交,构建了两个F2群体,对这两个群体进行脂肪氧化酶活性定量测定和遗传学分析,结果表明:F1均表现Lox1、Lox2活性高,经卡平方测验,F2群体基因型分布符合1:2:1的孟德尔分离比,说明低脂肪氧化酶Lox1、Lox2活性遗传分别由两对隐性单基因控制。
4、以1297与日本晴籼粳杂交构建的F2分离群体为定位群体,构建酶活极端的基因池,筛选在双亲和基因池间具有多态性的SSR标记,将水稻种胚低脂肪氧化酶Lox1基因定位于水稻第3染色体上SSR标记RM4512和RM282之间,遗传距离分别为13.0cM和9.1cM。将Lox2定位于水稻第3染色体上SSR标记RM1022和RM7197之间,遗传距离分别为4.4cM和7.9cM,Lox1和Lox2紧密连锁,为两基因的精细定位和克隆打下基础。另外,对RNAi转Loxs基因种子进行了耐储性评价。