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自2020年以来,我国川渝部分地区鹅场陆续爆发了一种以痛风为主要特征的代谢性传染病。该病主要发生在20日龄以内的雏鹅,患病鹅心脏、肝脏和肾脏等主要内脏器官表面覆盖一层白色尿酸盐颗粒,关节腔内充满大量的尿酸盐,严重者肌肉处也有尿酸盐沉积,死亡率最高可达50%,给各养殖场造成了巨大的经济损失。因此,本研究对川渝部分地区疑似痛风致死雏鹅病料进行检测,通过分离培养得到四株鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）,并对其进行全基因测序和遗传进化分析;利用分离毒株建立一种特异性强和稳定性好的琼脂扩散试验检测方法;对建立的琼脂扩散试验与间接ELISA两种方法进行比较,为川渝地区GAstV病的防制提供参考,现将结果报告如下:1.GAstV疑似病料检测:本试验在川渝部分地区采集剖检明显可见心脏和肝脏均有一层白色石灰样膜状物包裹、尿酸盐沉积严重的病死雏鹅42份,对病料组织进行核酸提取、设计引物、病毒检测、病毒分离培养和动物回归试验,结果显示GAstV阳性39份,阳性率92.86%,其中GAstV为唯一致病病原四份。将其肝脏、肾脏组织研磨经双抗处理、0.22μm滤膜除菌后分别接种9～11日龄鹅胚进行病毒分离培养,共分离出四株病毒。动物回归试验结果表明:三种方式均可导致雏鹅感染,RT-PCR检测GAstV均为阳性。口服组和肌内注射组雏鹅发病不典型,但部分鹅只出现死亡,皮下注射组发病较典型,死亡雏鹅剖检可见肾脏肿大,表面布满出血点,心脏、肝脏有大量尿酸盐渗出,形成一层尿酸盐薄膜,胸肌处明显可见弥散分布的白色尿酸盐沉积块,输尿管内充满大量尿酸盐,各种病变症状与自然感染病例一致。2.四株GAstV全基因测序和遗传进化分析:根据GAstV XT1株全基因序列设计引物,对四株GAstV进行全基因测序,结果显示四株GAstV全长7182nt,ORF1a、ORF1b和ORF2分别有3255、1551和2115nt。与24株其他种属星状病毒（astrovirus,AstV）进行分析比对,系统进化树显示四株分离株与火鸡源、鸭源、鸡源和猪源AstV处在不同分支,与GAstV聚成一个分支（GAstV/FLX株和GAstV/AHDY株除外）,属于新型鹅星状病毒。全基因同源性分析显示四株分离株与国内外其他种属星状病毒分离株同源性在40.3%～99.9%之间,其中GAstV/SCGH株与GAstV/XT1株同源性最高（99.3%）,GAstV/CQRC-1株与GAstV/XT1株同源性最高（99.9%）,GAstV/CQRC-2株与GAstV/XT1株同源性最高（98.9%）,GAstV/CQYC株与GAstV/HLJ01株同源性最高（98.5%）,而与GAstV/AHDY株和GAstV/FLX株同源性较低（57.4%～57.7%）。氨基酸序列同源性分析显示ORF1a同源性在14.9%～100%之间,ORF1b同源性在39.6%～100%之间,ORF2同源性在16.7%～99.9%之间。种间遗传距离分析显示四株GAstV与其他患痛风鹅中分离得到的GAstV毒株遗传距离相近（0.000～0.028）,与致肠道炎症的GAstV/FLX株和GAstV/AHDY株遗传距离较远（0.618～0.627）,与鸡源、鸭源和火鸡源ASt V代表毒株遗传距离也较远（0.425～0.703）。核苷酸突变分析显示GAstV/SCGH株、GAstV/CQRC-1株、GAstV/CQRC-2株和GAstV/CQYC株ORF1a分别有50、45、43和36个突变位点;ORF1b分别有15、16、20和15个突变位点;ORF2分别有27、16、20和27个突变位点。氨基酸突变分析显示GAstV/SCGH株、GAstV/CQRC-1株、GAstV/CQRC-2株和GAstV/CQYC株ORF1a分别有9、9、3和2个突变位点;ORF1b分别有0、0、0和1个突变位点;ORF2分别有8、3、4和10个突变位点,表明分离的四株病毒存在一定变异。3.GAstV琼脂扩散试验检测方法的建立:将GAstV鹅胚传代培养的尿囊液经氯仿三次处理杂蛋白后,一方面用透析袋浓缩20倍制备琼扩抗原,另一方面用0.3%甲醛37℃灭活24h多次免疫肉兔,制备琼扩抗体。通过对琼扩板琼脂浓度、缓冲液、pH值、琼扩板厚度、培养温度以及观察时间来确定AGP最佳工作条件。结果表明:最佳琼脂浓度为1.2%、最佳缓冲液为生理盐水、缓冲液最佳pH值为7.4,琼扩板最佳厚度为5mm、最佳培养温度为37℃,最佳观察时间为24h。敏感性试验中抗体最佳稀释倍数为1∶4,抗原最佳稀释倍数为1∶4。用禽呼肠孤病毒（avian orthoreovirus,ARV）、禽流感病毒（avian influence virus,AIV）、鹅细小病毒（goose parovovirus,GPV）、鹅圆环病毒（goose circovirus,GPoV）、禽坦布苏病毒（avian Tembusu virus,ATMUV）五种鹅常见病毒阳性血清和琼扩抗原、抗体进行特异性试验,结果显示除琼扩抗体孔出现条带外,其余孔均无条带,表明对ARV、AIV、GPV、GPoV和ATMUV五种鹅常见病毒无特异性反应,特异性强;稳定性试验结果显示:血清的多次检测,重复性好,稳定性强。符合率试验中阴性符合率达97.78%,阴性符合率较高。4.GAstV血清学检测:本试验在川渝部分地区共采集180份鹅临床血清样本,间接ELISA检测显示阳性4份,阳性率2.22%（P＞0.05）。其中四川广汉44份,阳性2份,阳性率4.54%;四川隆昌48份,阳性2份,阳性率4.17%;重庆荣昌与永川血清分别为42和46份,阳性均为0份,阳性率0。利用本研究建立的AGP检测方法进行检测,结果阳性0份,阴性180份,两种方法相比表明AGP敏感性比ELISA低。综上:川渝部分地区疑似痛风病死雏鹅中GAstV阳性率非常高,应引起高度重视,采取综合防制措施,以免造成经济损失。分离的四株GAstV全基因序列分析显示均属于新型鹅星状病毒,同源性与国内外其他分离株在40.3%～99.9%之间。建立一种特异性强、稳定性良好的GAstV琼脂扩散试验检测方法,为GAstV病的抗体及抗体滴度检测提供参考。血清学检测阳性率偏低,可能与检测方法、试剂盒、疫病的免疫反应等有关,具体原因需进一步研究。