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目的:通过基因重组技术和分子生物化学方法制备高纯度的、具有生物活性的hPPARγ1(human peroxisome proliferator-activated receptor gammar one)受体蛋白;应用该受体蛋白进行hPPARγ1受体的天然配体筛选。方法:1.以人脂肪组织总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出人PPARγ1LBD基因的cDNA片段,将其插入表达载体pMAL-p2X的麦芽糖结合蛋白(Maltose Binding Protein, MBP)编码基因malE的下游,转化宿主菌E. coli.TB1。并对重组质粒在大肠杆菌TB1中的表达条件进行优化。2.含重组质粒的大肠杆菌经优化条件诱导后,超声破菌取上清,所得杂蛋白经多糖亲和树脂纯化;产物再进行Xa因子酶切、多糖亲和树脂层析、DEAE-52阴离子交换树脂层析纯化回收。3.利用放射性配体饱和结合实验(radioligand saturation binding assay,RSBA)对MBP-hPPARγ1LBD融合蛋白和hPPARγ1LBD受体蛋白进行功能鉴定。4.利用放射性配体竞争结合实验(radioligand competition binding assay,RCBA)进行hPPARγ1天然配体的筛选,并测定所筛药物的IC50值和Ki值。结果:1.重组质粒pMAL-hPPARγ1LBD经BamHⅠ和HindⅢ双酶切,获得分子量为909bp DNA条带。2.当诱导剂IPTG浓度为0.4 mmol/L,30℃振荡诱导培养6 h时,含重组质粒的E.col TB1高效表达MBP-hPPARγ1LBD融合蛋白(分子量80KD,20mg/L培养物)。融合蛋白经亲和树脂纯化后用Xa因子酶切纯化回收获得高纯度hPPARγ1LBD(5mg/L培养物)。3.MBP-hPPARγ1LBD和hPPARγ1LBD与H3-ROS饱和结合实验结果显示:两者均能与H3-ROS很好的结合,其Kd均为89 nmol/L。说明两者结合配体的功能是等效的,具有生物活性。MBP不影响配体和受体结合。4.从大豆苷元、小檗碱、姜黄素、虎杖苷、人生皂苷、辣椒碱、柚皮苷、柚皮素、表没食子儿茶素没食子酸酯等中药单体中筛选出了姜黄素为hPPARγ1的配体。其IC50=8.82±0.74μmol/L,Ki=0.680μmol/L。结论:利用pMAL-p2x表达纯化系统获得了可溶的、高纯度的、具有生物活性的hPPARγ1LBD受体蛋白;成功地将hPPARγ1LBD受体蛋白应用于其天然配体的筛选。