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目的：通过动态检测DEN2NGC株感染小鼠髓源性DC后TLR7信号通路相关蛋白及细胞培养上清中IFN-α、IP-10、TNF-α的水平,探讨TLR7在登革病毒感染过程中的作用。 方法：利用白纹伊蚊C6/36细胞增殖DEN2NGC株,通过RT-PCR扩增、测序鉴定病毒,TCID50滴定毒力;直接免疫荧光检测DEN2(MOI=0.4)吸附鼠源性DC,利用RT-PCR检测相应时间点被感染DC内DEN2核酸水平;Western-blot动态检测TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清IP-10、TNF-α、IFN-α的水平。 结果： 1.白纹伊蚊C6/36细胞增殖DEN2NGC株病毒,其E基因区部分序列与GenBank提供的相应序列同源性达99.1％,对C6/36细胞的TCID50为105.8。 2.rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导C57/BL6小鼠髓源性DC,5d后获得纯度为70%的未成熟DC。 3.DEN2可感染鼠源性DC,被感染DC内病毒核酸水平48h达最高,72h有所降低。 4.DEN2感染鼠源性DC后24hDEN2感染组TLR7、MyD88、NF-κB的表达均高于正常对照组;48hDEN2感染组TLR7表达低于正常对照组,但MyD88、NF-κB的表达高于正常对照组;72hDEN2感染组TLR7、MyD88、NF-κB的表达均较前降低,且TLR7、MyD88的表达低于正常对照组。 5.DEN2感染鼠源性DC后,DEN2感染组细胞培养上清IFN-α、IP-10的水平明显高于正常对照组,IFN-α逐渐升高,72h分泌量达最高,可分泌933.94±29.02ρg/ml,IP-10在48h分泌达高峰,分泌量为834.44±43.60ρg/ml,结果具有统计学意义(P<0.05);TNF-α仅在感染后24h高于正常对照组,且具有统计学意义(P<0.05)。 结论： 1.rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导,可获得纯度为70%的小鼠髓源性未成熟DC。 2.DEN2NGC株可感染小鼠髓源性未成熟DC,且其核酸水平在DC内有所变化。 3.DEN2感染DC后TLR7蛋白的表达24h较正常对照组增高,随着病毒复制表达降低,MyD88、NF-κB蛋白的表达与病毒核酸水平呈正相关。 4.DEN2可刺激小鼠髓源性未成熟DC分泌IFN-α,IP-10,TNF-α等细胞因子。