本试验构建了禽流感HA5和HA9基因共表达禽痘病毒转移载体,经转染、蓝斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传形状稳定的HA基因重组禽痘病毒。提取感染重组病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA进行PCR扩增,获得1.7k6的携带有外源目的基因片段。收集纯化的重组病毒CEF细胞,分别用H5亚型和H9亚型AIV多克隆血清作一抗,碱性磷酸酶标记的鸡IgG为二抗进行Western blot检测,结果表明重组痘病毒能在体外的CEF细胞表达HA糖蛋白。用该重组病毒进行鸡翅刺种免疫60日龄SPF鸡,免疫3周后,每只鸡用50XLD H5亚型HPAIV攻毒,H5免疫组无一发病和死,攻毒保护率100%;H9组用50XLD H9亚型LPAIV攻毒,攻毒保护率20%;对照组全部发病并在攻毒后3-9天相继死亡,发病率和死亡率均为100%。H5抗体效价检测结果表明重组病毒免疫组鸡在免疫后7大即可检测到高效价的HI5抗体,抗体效价在免疫后14天达到高峰,随后在较高水平上缓慢下降,攻毒对抗体效价及其变化没有影响;而H9抗体检测效价较低,平均1.2Log2。通过本试验研究,获得了遗传性状稳定,表达AIV HA5和HA9基因重组禽痘病毒,SPF鸡免疫和攻毒试验结果表明,重组病毒疫苗能全面诱导机体的细胞免疫和体夜免疫反应,对H5强毒攻击产生强的免疫保护,为进一步开展疫苗研究奠定科学的理论和实验基础。