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研究背景: 疟疾是热带和亚热带最为常见且致命的疾病,在撒哈拉以南非洲和东南亚地区流行严重。在导致疟疾的四种疟原虫中,恶性疟原虫引起的恶性疟最为危险致命。恶性疟原虫裂殖子表面蛋白(Plasmodium falciparum merozoite surface protein, PfMSP)是一组主要分布于疟原虫裂殖子表面的重要的抗原,其中恶性疟原虫的裂殖子表面蛋白1 (Plasmodium falciparum merozoite surface protein l, PfMSP-l)和恶性疟原虫的裂殖子表面蛋白 2 (Plasmodium falciparum merozoite surface protein 2, PfMSP-2)存在着独特的等位基因类型,在序列和大小上又具有显著的序列多态性,因此,它们既是疟疾疫苗的重要的备选抗原成分,同时也作为重要的分子标记被应用于疟疾的分子流行病学研究中。广东省自上世纪七十年代就开展医疗援非工作,主要的援助国家就是赤道几内亚,该国是全世界疟疾感染最为严重的地区之一。因此有效地掌握赤道几内亚疟疾动态和疟原虫不同种株的特征,对于该地区的疟疾防治和临床用药都具有重要的科学意义。 目的: 本研究拟借助分子生物学方法,对前期收集的赤道几内亚比奥科岛恶性疟原虫临床分离株中的 PfMSP-1、PfMSP-2 和谷氨酸富有蛋白(Plasmodium falciparum glutamate rich protein, PfGLUR)等位基因的流行特征和基因多态性进行调查。 方法: 使用免疫胶体金法试剂盒和显微镜镜检(WHO规定确诊疟原虫的标准方法),荧光定量PCR进行虫种鉴定,经过筛选后最后确诊为恶性疟原虫感染的病人,在得到患者同意后,收集恶性疟疾患者2-3 滴手指末端血,制备干血斑。随机抽取181份临床患者的滤纸血样本,采用Chelx-100法提取恶性疟原虫基因组DNA。采用巢式PCR (Nest-PCR)方法, 使用特异引物扩增疟原虫虫株 PfMSP-1 基因、PfMSP-2 基因和 PfGLUR 中间多态区的目的片段。凝胶电泳鉴定扩增产物,根据电泳片段大小对上述三个基因的等位基因型进行分析。 结果: (1)PfMSP 1 基因分型:181份恶性疟患者血样中有171份扩增出MAD20型基因片段(占94.48%),167份扩增出Kl型基因片段(占92.27%),124份扩增出RO33型基因片段(占68.51%); (2) PfMSP2基因分型:181份恶性疟患者血样中有170份扩增出IC/3D7型基因片段(占93.92%),126份扩增出FC27型基因片段(占69.61%); (3)PfGLURP的基因分型:181份恶性疟患者血样中有91份为单一感染,基因片段在600-1100bp之间,其中950-1000bp大小的分离株出现的频率最高,属于优势虫株。PfMSP-1基因型中MAD20型和K1型的混合感染为164份,出现的频率最高,K l型、MAD20型和RO33型三者的混合感染为114份,而PfMSP 2的混合感染为122份。PfMSP-1和PfMSP-2同时出现混合感染的样本为120份,PfMSP-1、PfMSP-2和PfGLURP三种基因同时出现混合感染的样本为0,表明不同等位基因型的混合感染率较低。 结论: 赤道几内亚比奥科岛地区的恶性疟原虫,在PfMSP-1基因和PfMSP-2基因中分别以MAD20型和IC/3D7型出现的频率最高,为优势基因型;PfGLURP基因以950-1000bp大小的分离株出现的频率最高,为优势虫株。PfMSP1的混合感染以MAD20型和K1型为主,占90.6%, PfMSP-1和PfMSP-2同时出现混合感染的样本占66.3%,而PfMSP-1、PfMSP-2和PfGLURP三种基因的交叉混合感染率为0。