啤酒花中α-酸、β-酸分离提取工艺优化及其抑菌活性分析

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 10次 | 上传用户:dxw2814
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本论文以具有地域特色的甘肃玉门地区主栽啤酒花品种青岛大花为原料,通过单因素试验、正交试验和中心旋转组合试验,对有机溶剂法结合微波及超声波辅助萃取酒花中α-酸、β-酸的工艺条件开展了优化筛选;采用单因素试验与一次回归正交试验方法,对利用酸碱沉淀法分离α-酸、β-酸的最佳工艺条件进行了优化研究,以HPLC法对分离的α-酸、β-酸样品进行了纯度分析,并对α-酸、β-酸的抑菌活性进行了初步的探讨。旨在为相关企业开展啤酒花的深加工生产探索途径,并为α-酸和β-酸的药用价值开发提供一定的技术支撑和参考。取得的研究结果如下:1.有机溶剂萃取α-酸的结果表明,萃取浸膏α-酸含量的高低顺序为:石油醚>二氯甲烷>甲苯>苯>乙醇>丙酮,石油醚的萃取效果最佳,α-酸的质量分数为40.97%;萃取浸膏β-酸的结果显示,萃取浸膏β-酸含量高低次序为:石油醚>二氯甲烷>乙醇>甲苯>苯>丙酮,石油醚的萃取效果最为显著,β-酸的质量分数为26.82%。2.通过单因素试验和正交试验优化微波辅助萃取α-酸、β-酸的最佳工艺参数,结果表明:微波辅助萃取α-酸的最佳工艺组合为A1B1C2D1,即浸泡时间30min,微波时间15s,微波功率267W,料液比1:15(g:mL);各处理组合极差之间的关系为RA> RD> RB>RC,即微波时间>料液比>微波功率>浸泡时间,在此条件下,萃取浸膏α-酸的质量分数为53.13%;微波萃取β-酸的最佳工艺参数组合为A1B2C3D3,即浸泡时间为25min,微波时间35s,微波功率为373W,料液比为1:30;各处理组合极差之间的关系为RD> RC> RA>RB,即浸泡时间、料液比、微波时间、微波功率,在此条件下,β-酸的质量分数为35.03%。3.通过单因素试验和中心旋转组合试验优化了α-酸、β-酸超声波辅助萃取的工艺条件,应用响应曲面法对结果进行分析,结果表明,啤酒花中α-酸超声波萃取的最佳工艺组合为:液料比1:18、超声时间15min、超声功率203W、浸泡时间59min。在此条件下,萃取浸膏α-酸的质量分数预测值为43.91%,验证试验所得α-酸的质量分数为43.65%,实际值与预测值之间的相对误差为0.59%。利用Design-Expert7.1软件分析得出回归方程为: Y=-104.73646+10.33525X31+4.36234X32-0.29762X312-0.14882X322-5.52196×10-4X332-1.09107×10-3X342。β-酸超声萃取的最佳工艺条件为:料液比1:18,超声时间17min、超声功率228W,浸泡时间68min。在此条件下,萃取浸膏β-酸质量分数的预测值是16.22%,验证试验所得β-酸的质量分数为16.12%,实际值与预测值之间的相对误差为0.62%,利用Design-Expert7.1软件分析得出回归方程为:Y=-181.73796+14.23562X31+2.81392X32+0.31502X33-0.081552X31X32-2.99542E-003X31X33+0.018411X31X34+4.16242E-003X32X33+3.02428E-004X33X34-0.39475X312-0.077761X322-8.51607E-004X332-9.70674E-003X342。4.通过单因素试验和一次回归正交试验优化了α-酸、β-酸的分离工艺,研究结果显示,α-酸的最佳工艺条件为:碱用量8.5%(g:g),无水乙醇用量为1mL/g,料液比为1:60(g:mL);主次因素顺序为:无水乙醇用量>料液比>碱用量;用全回归法求得的多元回归方程式为:Y=82.667+1.515X31-2.950X32+2.037X33。β-酸的最佳工艺参数为:最佳工艺条件为碱用量6.5%(g:g),无水乙醇用量为1mL/g,料液比为1:60;主次因素顺序为:碱用量>料液比>无水乙醇用量,用全回归法求得的多元回归方程式为:Y=84.375-2.843X31-1.995X32+2.360X33。5.采用HPLC外标法,对以石油醚作为萃取溶剂,微波法辅助萃取,酸碱沉淀法分离这一工艺技术获得的α-酸、β-酸进行定性和定量分析,结果表明:经过这种工艺分离提取后的物质确是α-酸、β-酸,其纯度分别达到86.43%和87.12%。证明该工艺是一种较为理想的分离纯化酒花中α-酸和β-酸的方法。6.采用扩散法测定了分离获得的α-酸、β-酸样品的抑菌活性,结果表明:在供试的α-酸、β-酸样品浓度10-100mg/mL范围内,对Sacchromuces cerevisiae、Asperyillusnigar van、Trichothecium roseum、Penicillium sp.、Geotrichum candidum这五种真菌均没有抑菌效果,不产生抑菌圈;对Eschercihia Coli、Bacillus Sukatilis和Staphylococcusaureus有明显的抑制作用,并且随着α-酸、β-酸溶液浓度的增大抑菌效果越明显,抑菌圈越大。α-酸对Eschercihia Coli和Bacillus Sukatilis的MIC均为2.5mg/mL,对Staphylococcus aureus为5.0mg/mL;β-酸对Eschercihia Coli和Staphylococcus aureus的MIC均为1.25mg/mL,而对Bacillus Sukatilis为2.5mg/mL。综合上述结果,通过正交试验设计、中心旋转组合设计与一次回归正交设计,可以使α-酸、β-酸的分离提取工艺得到优化和改进,且分离后的α-酸、β-酸对EschercihiaColi、Bacillus Sukatilis和Staphylococcus aureus有抑菌活性。
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