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目的:通过实验研究,探讨大黄、赤芍对85%肝切除术后肝衰竭大鼠肝细胞再生NO调控通路影响的研究。 方法:采用85%肝叶切除术构建大鼠肝衰竭肝再生模型,SPF级SD大鼠210只,随机分为7组:正常组30只、假手术组30只、模型对照组30只、大黄注射液组30只、赤芍注射液组30只、大黄赤芍联合组30只、促肝细胞生长素组30只。检测血清ALT、AST、TBiL、PT、NOS、NO; Western blot法检测肝组织中NOS含量,免疫组织化学法检测肝组织中NOS的表达情况;检测肝再生指数、肝细胞有丝分裂指数、肝脏增殖指数、肝组织中PCNA;剩余大鼠用于168h存活率观察。 结果:(1)血清ALT、AST、TBiL、NOS、NO含量测定结果:正常组与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),组内比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组及药物干预组ALT、AST的峰值在术后12h,随后逐渐下降,药物干预组与模型组比较差异有显著统计学意义(P<0.01),大黄赤芍联合组与促肝细胞生长素组比较差异无统计学意义(P>0.05),从术后24h、36h、48h、72h结果提示,大黄组与赤芍组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组及药物干预组TBiL的峰值出现在术后24h,大黄赤芍联合组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与促肝细胞生长素组比较差异有统计学意义(P<0.05)。药物干预组及模型组血清中NOS、NO的峰值出现在术后12h,于术后36h出现个次峰值,组内比较差异有统计学意义(P<0.05),药物干预组分别与模型组、正常组和假手术组比较差异有显著统计学意义(P<0.01),大黄赤芍联合组与促肝细胞生长素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)PT测定结果:正常组与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),组内比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组及药物干预组PT的峰值在术后24h,随后逐渐下降。模型组和药物干预组与正常组和假手术组比较差异有显著统计学意义(P<0.01),药物干预组与模型组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。大黄赤芍联合组与模型组比较差异有显著统计学意义(P<0.01),与促肝细胞生长素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)肝组织中NOS含量及表达:模型组及药物干预组NOS分别在肝切除术后两次细胞分裂高峰期前出现高表达,时间点分别为12h、36h,于24h、48h后减弱。(4)肝再生指数(HMI):72h、168h时药物干预组高于模型组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),大黄赤芍联合组于168h肝再生指数达79.7±8.2%,促肝细胞生长素组肝再生指数达82.2±8.5%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(5)肝细胞有丝分裂指数(MI):模型组及药物干预组肝细胞有丝分裂于术后24h、48h出现2次高峰,药物干预组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),药物干预组有丝分裂指数明显高于正常组和假手术组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。(6)肝脏增殖指数(PI):模型组肝脏DNA增殖最高峰出现在术后24h,药物干预组峰值出现在术后24h、48h,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),大黄赤芍联合组与促肝细胞生长素组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(7)肝组织PCNA:模型组及药物干预组PCNA高峰出现在术后24h,术后48h再次出现个次峰值,随后下降。模型组和药物干预组与假手术组和正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。组内比较,在成模后24h药物干预组PCNA水平明显增高(P<0.05),其中以大黄赤芍联合组和促肝细胞生长素组最为明显。(8)成模后168h各组之间的存活率比较:以大黄赤芍联合组和促肝细胞生长素组疗效最佳,大黄组、赤芍组疗效其次,最差为模型组。 结论:(1)大黄、赤芍能改善肝叶切除术后肝衰竭大鼠的肝功能、凝血功能,提高大鼠生存率。(2)大黄、赤芍具有提高肝组织中 NOS在12h、36h表达强度的作用。(3)从肝再生指数、肝细胞有丝分裂指数、肝脏增殖指数和PCNA水平的表达等实验数据,推断大黄、赤芍具有促进肝衰竭大鼠肝细胞再生的作用。(4)大黄、赤芍使肝衰竭大鼠血清中 NOS、NO水平于肝细胞分裂高峰期前出现高表达。提示药物干预组可能是通过 NO信号调控而促进肝衰竭大鼠残存肝细胞的增殖,最终使肝切除术后肝衰竭大鼠生存率提高。