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近年来人们发现人脐血中含有一类非造血干细胞(non-HematopoieticStemCellsderividedfromhumanumbilicalcordblood，CB-nHSCs)，这类细胞具有多向分化潜能，甚至可以分化为神经细胞。脐带血易采集保存，对供体无损伤，且无社会伦理问题，为神经系统疾病的细胞替代治疗带来了新的希望。
本实验经密度梯度离心法分离新鲜脐带血，将获取的单个核细胞进行培养，记录细胞生长状况。通过流式细胞术分析新鲜分离的单个核细胞和培养10天后获得CB-nHSCs中CD34+，CD90+，CD166+细胞的比例。随后用不同组合的诱导剂作用于体外培养的CB-nHSCs，用免疫细胞化学方法检测β-tubulin-Ⅲ，NSE，GFAP，Gal-C等神经细胞特异性抗原的表达，比较不同条件下CB-nHSCs向神经细胞分化的情况。实验结果显示，CB-nHSCs体外培养10天时无CD34+细胞，CD166+细胞的比例达76.48％±4.54，较分离新鲜脐血得到的单个核细胞中CD166+细胞比例明显增高(p＜0.01)。各组诱导剂均可使人脐血非造血干细胞向神经细胞分化，RA+EGF+bFGF诱导组中NSE(17.38％±1.11)，Gal-C(57.02±％2.02)的表达高于RA和EGF+bFGF诱导组。而β-tubulin-Ⅲ(7.47％±1.16)，GFAP(2.88％±0.30)的表达低于RA诱导组。
CB-nHSCs作为一种潜在的种子细胞，其免疫原性的特征是不容忽视的。本实验通过流式细胞术检测原代培养CB-nHSCs和经IFN-γ处理后CB-nHSCs的HLA-ABC，HLA-DR表达。此外将原代培养的CB-nHSCs，传代细胞，RA诱导四天后表达神经细胞表面抗原的细胞，及经IFN-γ处理的CB-nHSCs与大鼠脾淋巴细胞进行混合培养，检测CB-nHSCs对异种淋巴细胞活化和增殖的作用，选取人源SH-SY5Y细胞作为阳性对照。同时，将原代培养的CB-nHSCs(实验组)和人源SH-SY5Y细胞(对照组)分别移植入成年SD大鼠左侧纹状体内。用免疫组化方法检测移植后2周，4周，8周时大鼠脑内移植区CD4+，CD8+细胞的聚集情况，并通过流式细胞术检测移植后不同时间点大鼠外周血中的CD4+，CD8+细胞百分率。实验结果显示CB-nHSCs表达HLA-ABC，低表达HLA-DR，IFN-γ作用于CB-nHSCs没有明显改变其HLA-ABC,HLA-DR的表达水平。混合淋巴细胞培养中未见CB-nHSCs明显刺激淋巴细胞的增殖，同时，分化，传代和IFN-γ处理的CB-nHSCs都表现对异种淋巴细胞活化增殖的弱刺激。大鼠移植CB-nHSCs后CD4免疫组化显示：实验组2周，4周，8周时在脑内引起的CD4+细胞聚积水平低于对照组，并且2周，4周时与对照组相比具有显著性差异(p＜0.01)。实验组阳性细胞随时间逐渐下降，各时间点间无显著性差异(p＞0.05)。实验组2周，4周，8周时脑内CD8+细胞聚积水平均显著低于阳性对照组(p＜0.01)，实验组阳性细胞数4周稍有增加，但8周时又下降，实验组各时间点之间无显著性差异(p＞0.05)。大鼠CB-nHSCs移植后外周血中CD4+,CD8+细胞在移植后4周时较2周时升高(p＞0.05)，但显著低于对照组(p＜0.01)，而第8周明显下降(p＜0.05)，2周与8周之间无显著性差异。
本实验结果表明CB-nHSCs体外培养可以大量增殖，并且此时CD166+细胞比例增加。RA和RA+EGF+bFGF的应用对CB-nHSCs的神经诱导效果好于DMSO与BHA的共同作用。EGF和bFGF并没有增加RA诱导的神经前体细胞和神经元的数量，但明显增加了其诱导少突胶质细胞的数量。体外培养，传代，分化，IFN-γ处理的CB-nHSCs在淋巴细胞共培养中表现低或无刺激性，及异种移植的低免疫排斥反应特性，表明其具有较低的免疫原性，这将为CB-nHSCs应用于神经系统疾病细胞替代治疗提供初步的依据。