论文部分内容阅读
背景越来越多的研究发现突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein 95, PSD-95)在各种神经系统病变中都有较为明显的表达变化,并已证实其与中枢神经系统的发育、感觉信号传递、缺血性脑损伤等各种急慢性神经细胞死亡相关。于是有学者尝试研究PSD-95与周围神经系统的关系,以期找到新的治疗周围神经损伤的靶点。目的采用免疫组化方法半定量方法观察SD鼠面神经不同程度损伤后,面神经元的凋亡形态改变及PSD-95在面神经核中的表达变化。设计、时间及地点随机对照动物实验,于2007-9/12在重庆医科大学附属第二医院超声研究所完成。材料普通级健康成年远交群(sprague dawley,SD)大鼠,雌雄不拘,鼠龄3个月,体质量180～230g,由重庆医科大学动物中心提供。兔抗鼠PSD-95多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司),链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶-9001(streptomycete avidin- peroxydase 9001, SP-9001)兔抗SP免疫组化染色试剂盒、3,3′-二氨基联苯胺(3,3′-diaminobenzidine, DAB)试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。方法取成年SD大鼠65只,随机分为1个对照组(5只)和3个损伤组(每组20只),损伤组分别在双侧面神经干造成暴露、钳夹及切断3种不同程度损伤。于损伤后l、3、7、14d分别取出脑干。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色行组织学染色观察面神经核凋亡神经元的形态变化,PSD-95抗体免疫组化染色,光镜下放大400倍计数PSD-95标记的阳性细胞数。主要观察指标观察SD鼠面神经不同程度损伤后,凋亡面神经元的形态改变及PSD-95在面神经核中的表达变化。结果①暴露组各时间点突触后密度蛋白95表达与面神经元形态均无明显变化(P>0.05)。钳夹组、切断组面神经损伤后1d面神经核突触后密度蛋白95表达升高(P<0.05),7d时再次明显增高(P<0.01),14d时仍未见明显下降;面神经元在3d时呈现出凋亡变化,7d时尤其明显,14d时依然没有恢复的迹象。②在同一时间点不同损伤组面神经核PSD-95阳性细胞数和面神经元凋亡的严重程度均为切断组>钳夹组>暴露组。结论①不同程度面神经损伤后,面神经核PSD-95表达水平随损伤程度加重而增高;②损伤后PSD-95水平在1d和7d各出现1个高峰。由于损伤后1d正好是神经细胞凋亡相关基因激活的时间,而损伤后7d是激活基因蛋白大量转录的高峰时间,所以我们认为PSD-95与面神经损伤后面神经元的凋亡可能有关。