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大肠癌（colorectal cancer,CRC）是世界范围内最常见的癌症之一，其发病率和死亡率均居于前五位。在中国大肠癌的发病率在过去30年里稳步增加,这给家庭和社会造成了巨大的负担。术后放化疗是中晚期大肠癌患者的主要治疗手段。但由于原发性或继发性化疗耐药，特别是多药耐药(MDR)的出现使化疗效果不佳，患者预后差。这种现象是目前临床治疗过程中的主要障碍。MDR被定义为在对一种药物出现耐药后，同时抵抗一系列结构和机制无关的抗癌药物。MDR的发生和发展涉及很多基因的改变和作用，其中ABC转运蛋白家族中MDR1（多药耐药蛋白1）是研究最多的，MDR1的编码蛋白P-gp（P-糖蛋白）是一种ATP能量依赖性药物输出泵，可将细胞内药物泵至细胞外，从而降低药物在细胞内的蓄积，导致化疗效果下降。近年来微小RNA(miRNA,microRNAs）受到广泛的关注。miRNA是一类长度约20个核苷酸序列的非编码小分子RNA，具有调节基因表达的功能。成熟的miRNA通过与RNA诱导沉默复合物(RISC)结合形成RISC复合物，后者可特异性识别靶mRNA的3′非编码区，从而引起靶mRNA的降解、翻译抑制，在转录后水平调控一个或多个基因的表达。miRNA作为内源性小分子RNA几乎在所有肿瘤中均有异常表达。miR-143位于人类第5号染色体上，在多种肿瘤中发挥抑癌作用。有研究发现miR-143的异常表达可调节细胞增殖、细胞生长、克隆形成，细胞凋亡，细胞周期等。有报道显示miR-143可抑制前列腺癌细胞cyclin D1的表达。但miR-143-3p与大肠癌多药耐药的关系鲜有文献报道。 目的： 本实验在组织水平通过检测miR-143-3p、NF-κB p65与P-gp在大肠癌组织及正常黏膜组织中的表达，分析miR-143-3p、NF-κB p65、P-gp与临床病理学特征的关系及三者的相关性。 细胞水平通过转染miR-143-3p mimics、miR-143-3p inhibitor、miR-143-3p mimics NC、miR-143-3p inhibitor NC检测NF-κB p65mRNA、MDR1mRNA的表达，并分析其相关性。 方法： 1.收集2016年6月至2017年3月河北省承德市多家医院经手术切除并经术后病理证实为大肠癌的初治患者。其中石蜡标本110例其中大肠癌组织69例，正常肠黏膜组织41例(距离癌灶边缘＞10c m)。新鲜组织80例，其中大肠癌组织50例，正常肠黏膜组织30例(距离癌灶边缘＞10c m)。 2.采用免疫组化SP法检测NF-κB p65蛋白和P-gp在大肠癌组织和正常肠黏膜组织中的蛋白表达水平，并分析NF-κB p65蛋白和P-gp表达与临床病理特征之间的关系以及二者在大肠癌组织中表达的相关性。 3.采用蛋白印迹法(Western blot)检测NF-κB p65蛋白和P-gp在大肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达情况。 4.采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测miR-143-3p、NF-κB p65mRNA和MDR1mRNA在大肠癌组织和正常肠黏膜组织的表达情况，进一步分析大肠癌组织中miR-143-3p、NF-κB p65mRNA和MDR1mRNA的表达与临床病理特征之间的关系。 5.细胞水平通过转染miR-143-3pmimics、miR-143-3p inhibitor、miR-143-3p inhibitor NC及miR-143-3p mimics NC阴性对照观察NF-κB p65mRNA、MDR1mRNA的表达情况。 6.应用SPSS19.0统计学软件进行统计学分析，得出实验结论。 结果： 1.免疫组化结果 1.1 NF-κB p65蛋白与P-gp在大肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达 NF-κB p65蛋白在大肠癌组织中阳性表达率为（81.4%）显著高于正常肠黏膜组织（24.4%），差异有统计学意义（P＜0.05）。P-gp在大肠癌组织中阳性表达率为（89.9%）显著高于正常肠黏膜组织（19.5%），差异有统计学意义（P＜0.05）。 1.2 大肠癌中NF-κB p65蛋白与P-gp表达与临床病理学特征的关系 大肠癌中NF-κB p65表达水平与大肠癌的分化程度、浸润深度，淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P＜0.05)。大肠癌中P-gp表达水平与大肠癌的分化程度、浸润深度相关，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 1.3 大肠癌中NF-κB p65蛋白表达与P-gp表达的相关性 大肠癌组织中NF-κB p65蛋白和P-gp的表达呈正相关，差异有统计学意义(rs=0.490，P＜0.05)； 2.Western Blot实验结果 大肠癌组织中NF-κB p65蛋白的表达显著高于癌旁正常肠粘膜组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。大肠癌组织中P-gp的表达显著高于癌旁正常肠粘膜组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 3.实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验结果 3.1 大肠癌组织中MDR1mRNA和NF-κB p65mRNA的表达均明显高于正常肠黏膜组织，差异均有统计学意义(P＜0.05)。大肠癌组织中miR-143-3p的表达明显高于正常肠黏膜组织，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3.2 MDR1mRNA和NF-κB p65mRNA在大肠癌组织中的表达均与组织分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤形态、浸润深度均无关，差异均无统计学意义(P＞0.05)。 3.3 miR-143-3p在大肠癌组织中的表达与大肠癌组织分化程度、Dukes分期、淋巴结转移、浸润深度均有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤形态均无关，差异均无统计学意义(P＞0.05)。 3.4 大肠癌组织miR-143-3p表达与MDR1mRNA表达的关系Spearman相关分析显示，大肠癌组织中miR-143-3p表达与MDR1mRNA表达呈负相关，且具有统计学意义（r=-0.467,P＜0.01）。 3.5 大肠癌细胞中转染miR-143-3p mimics24h后与空白对照组相比NF-κB p65mRNA和MDR1mRNA的表达均下降。 3.6 大肠癌细胞中转染miR-143-3p inhibitor24h后与空白对照组相比NF-κB p65mRNA和MDR1mRNA均高表达。 3.7 大肠癌细胞中转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC24h后与空白对照组相比NF-κB p65mRNA和MDR1mRNA的表达无明显变化。 结论： 1.NF-κB p65蛋白与P-gp在大肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜组织，两者表达成正相关，从蛋白水平上证实二者均参与大肠癌的发生、发展过程。 2.NF-κB p65mRNA、MDR1mRNA在大肠癌中的表达显著高于癌旁正常黏膜组织，两者表达成正相关，从基因水平上证实了二者共同参与了大肠癌发生发展的过程。 3.大肠癌组织中miR-143-3p表达降低与分化程度、Duke’s分期、浸润深度、淋巴结转移有关。与NF-κB p65mRNA、MDR1mRNA表达均呈负相关。 4.在大肠癌细胞中miR-143-3p对NF-κB p65mRNA、MDR1mRNA表达具有调控作用.