我国作为农业大国每年秸秆的产量非常高,但是仅有少量被用于工业生产,大多数都被作为废弃物直接倾入环境,这样形成了非常大的污染以及浪费秸秆被用于制作青贮饲料是使秸秆“变废为宝”的有效途径之一,而秸秆能否被有效利用取决于木质素能否有效降解。木质素作为青贮饲料的添加剂可以大大提高其利用率,但由于其产量较低无法满足工农业需求。据报道称漆酶已在多种宿主细胞中实现异源表达,以求提高其产量。而乳酸菌是食品级安全微生物,若能作为宿主细胞异源表达漆酶,构建重组工程乳酸菌作为新型微生物制剂添加于青贮饲料中,将发挥乳酸菌与漆酶的双重功能,漆酶是重要的木质素降解酶,具有分泌漆酶功能的重组乳酸菌若用于青贮饲料的发酵,可以大大提高饲料的利用率及饲料的品质,具有广阔的应用前景。本研究是在将杏鲍菇漆酶基因转入乳酸杆菌中的基础上,研究该重组乳酸菌是否能表达漆酶,并且研究该漆酶的相关酶学性质和功能,为将具有分泌漆酶功能的乳酸菌添加于青贮饲料中提供基础依据。本实验室将杏鲍菇漆酶基因接入食品级宿主细胞乳酸菌中,成功构建重组工程乳酸菌。本研究将获得的乳酸菌工程菌株进行扩大培养,获得重组菌分泌的漆酶,研究了该漆酶的酶学特性。进行了如下试验：1.为筛选出单个转化株,将重组工程乳酸菌液涂布到含有红霉素的固体MRS培养基中,挑取转化子的菌落进行PCR,然后筛选阳性重组乳酸菌。2.并提取筛选到的阳性重组子质粒,进一步进行PCR验证。3.将验证过确实存在漆酶基因的阳性重组子涂布到含有0.04%愈创木酚的MRS固体培养基中进行培养,表达产物用平板显色法实验进行检测,重组乳酸菌若能产生漆酶菌落颜色会变成红棕色,表明该重组子具有分泌漆酶的能力,挑取颜色变化较深的菌落,摇瓶培养并用ABTS测定其表达的漆酶活性。4.比较重组工程乳酸菌与原载体乳酸菌的产酸性能。成功筛选到具有产漆酶能力的重组工程乳酸菌,对其适宜温度、酸碱度进行了研究。实验结果表明：重组工程乳酸菌具有表达漆酶的能力,但其分泌的漆酶酶活性相对很低,酶活低于3U/L,大大低于原杏鲍菇分泌的漆酶活性。其最适pH为3.5,最适温度为室温。重组乳酸菌与原乳酸杆菌相比其生物特性与产酸性能没有明显变化。